奥沙西泮杂质Ⅱ的制备方法

付 林，廖 俊

（华中药业股份有限公司，湖北 襄阳441021）

奥沙西泮（Oxazepam）属于苯二氮类镇静催眠药，具有显著的镇静、抗焦虑作用，同时具有较好的松驰肌肉和抗抽搐作用，能缓解神经官能症患者的焦虑不安、精神紧张及烦恼失眠等症状，用于神经官能症、失眠及癫痫的辅助治疗，适用于老年人或肾功能不全者。在同类苯二氮卓类镇静催眠药中，奥沙西泮的代谢过程简单，受年龄及肝功能影响较小；半衰期较短，不易在体内蓄积；成瘾性较小，可广泛应用于成瘾行为的基础研究[1]。进行奥沙西泮杂质的质量研究，对于原料药研究和制剂研究有着重要而深远的意义。

有关物质是药品的关键质量属性之一，也是仿制药一致性评价的重要内容，涉及到药品的安全性及其质量的可控性[2]。随着仿制药市场的逐步扩张及国内仿制药一致性评价的进行，制药企业对杂质对照品的需求迅猛增长。中国药典2015版中，对奥沙西泮原料及其片剂中有关物质的检测项规定了2种已知杂质，分别为(3RS)-7-氯-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-乙酸酯(杂质Ⅰ)和6-氯-4-苯基喹啉-2-甲醛(杂质Ⅱ)[3]。其中杂质Ⅰ为奥沙西泮制备过程的中间体，杂质Ⅱ为奥沙西泮的主要降解产物，也是有关物质检测项中较大的单项杂质[4]。奥沙西泮在强酸、强碱、光照、氧化及热环境下均不稳定，都会产生杂质Ⅱ[5]。尽管在上述条件下均会生成杂质Ⅱ，但是一方面，奥沙西泮不能完全降解生成杂质Ⅱ，体系中总有含量可观的奥沙西泮存在，另一方面，奥沙西泮在降解产生杂质Ⅱ的同时，会伴随产生成分复杂、比例较大的其它多种杂质。上述情况为制备纯度较高的杂质Ⅱ带来极大的困难。采用薄层色谱技术（PTLC）或液相制备柱技术进行分离纯化[5]，制备得到的杂质Ⅱ数量很少，制备周期长，制备成本高，不能满足对奥沙西泮杂质Ⅱ进行定性和定量分析的需要。

图1 奥沙西泮及其杂质的化学结构

奥沙西泮中的杂质Ⅱ是奥沙西泮的主要降解产物，控制奥沙西泮中杂质Ⅱ的含量，对提升奥沙西泮的质量具有重大意义。制备奥沙西泮中的杂质Ⅱ，可用于奥沙西泮生产中杂质的定性和定量分析，从而提高奥沙西泮的质量标准，为安全用药提供重要的指导意义。目前尚没有6-氯-4-苯基喹啉-2-甲醛（杂质Ⅱ，中国药典2015版）制备方法的相关文献报道，为此，我们设计了奥沙西泮中杂质Ⅱ的合成路线（图 2）。

图2 奥沙西泮中杂质Ⅱ的合成路线

本研究的制备以奥沙西泮为原料，反应及后处理工艺简单，不需要使用薄层色谱技术（PTLC）或液相制备柱技术进行分离纯化，可大幅缩短制备周期，降低制备成本，大幅提高杂质Ⅱ的制备效率。该制备工艺具有原料易得、工艺过程简单、制备得到的奥沙西泮杂质Ⅱ纯度较高等优点。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

含量测定采用1200安捷伦液相色谱仪。

奥沙西泮（实验室自制, 纯度99.7%），其他试剂均为国产工业品，未进一步处理直接使用。

1.2 合成部分

向反应瓶内加入350mL甲苯、10g奥沙西泮、0.8g对甲苯磺酸、0.5mL三乙胺，搅拌升温，于 65～70℃保温反应 5h。降温至 20～25℃，用400mL×3饱和盐水洗至中性，无水硫酸钠干燥，滤出硫酸钠，滤液减压浓缩，再用甲醇10mL×2置换后，加入10mL石油醚，冷冻、过滤、烘干，得到5.8g奥沙西泮杂质Ⅱ，HPLC纯度99.79%。

2 结果与讨论

以奥沙西泮为原料制备奥沙西泮杂质Ⅱ的实验过程中，考察了不同溶剂、不同的反应条件对目标产物奥沙西泮杂质Ⅱ纯度的影响，最终制备得到纯度99%以上的杂质Ⅱ。

2.1 奥沙西泮杂质Ⅱ制备过程中反应溶剂的选择

在奥沙西泮杂质Ⅱ的制备过程中，固定以盐酸作为反应条件，考察不同反应溶剂对底物原料奥沙西泮的反应比例（TLC）、能否形成奥沙西泮杂质Ⅱ粗品固体、其它杂质斑点的数目与比例（TLC）、最终反应体系中目标产物奥沙西泮杂质Ⅱ的比例（TLC）等因素的影响（表1）。

表1 反应溶剂对反应体系中目标产物奥沙西泮杂质Ⅱ纯度的影响

采用甲醇与乙醇等质子溶剂为反应溶剂进行反应时，反应时间较快，但是数量可观的奥沙西泮原料在反应尚未完全的情况下，就已经产生成分多样、比例较大的其它杂质，最终反应体系中目标产物的比例约60%，无法形成奥沙西泮杂质Ⅱ粗品固体。采用非质子溶剂甲苯或乙酸乙酯进行反应时，反应的选择性有大幅提高，最终反应体系中目标产物的比例达85%以上，并且可以得到奥沙西泮杂质Ⅱ粗品固体。对几种溶剂进行比较及筛选，确定了以甲苯或乙酸乙酯作为反应溶剂较为合适，并优选甲苯作为反应溶剂。

2.2 奥沙西泮杂质Ⅱ制备过程中反应条件的选择

确定反应溶剂为甲苯，反应温度为65～70℃，考察酸性、碱性等多种制备条件对奥沙西泮杂质Ⅱ的收率和纯度的影响，结果见表2。

表2 不同反应条件对奥沙西泮杂质Ⅱ收率和纯度的影响

不同的反应条件对奥沙西泮杂质Ⅱ收率和纯度的影响很大。酸性条件下，在硫酸中反应1.5h，反应基本完全，但生成物的成分复杂，奥沙西泮杂质Ⅱ的纯度不到90%；在盐酸中的反应较快，但是奥沙西泮杂质Ⅱ的收率和纯度均不理想，杂质Ⅱ的纯度为91%；在对甲苯磺酸与盐酸中的反应情况基本相当。碱性条件下，在氢氧化钠中反应较快，5h基本能反应完全，反应体系的成分复杂，奥沙西泮杂质Ⅱ的纯度不到80%；碳酸钾中的反应较慢，体系中奥沙西泮原料的残余较多，除奥沙西泮原料外，生成物中的其它成分复杂，延长反应时间后，其它杂质的比例越来越大，无法形成奥沙西泮杂质Ⅱ粗品固体；三乙胺中的反应很慢，有产物生成，但同时有50%以上的奥沙西泮原料不能反应，无法形成奥沙西泮杂质Ⅱ粗品固体。我们在进一步筛选反应条件时偶然发现，选用对甲苯磺酸进行反应时，加入吡啶或三乙胺，能大幅提高反应的选择性，减少副反应的产生，奥沙西泮杂质Ⅱ的收率能达到58%，纯度达到99%，为此确定将对甲苯磺酸与三乙胺共存的情况作为最终反应条件。

最终确定了制备的反应条件：以奥沙西泮为原料，在非质子溶剂甲苯中，加入催化剂对甲苯磺酸和缓冲试剂三乙胺，保温反应，反应完毕后经处理得到奥沙西泮杂质Ⅱ。杂质Ⅱ纯度达到99%以上，总产率达到58%。

该制备方法的优点：1)反应及后处理工艺简单，总收率较高；2)在非质子溶剂中加入催化剂及缓冲试剂，有利于降低反应活性，减少副反应，从而提高奥沙西泮杂质Ⅱ的纯度；3)纯化过程简洁，只需在溶剂中重结晶和打浆，不需要使用薄层色谱技术（PTLC）或液相制备柱技术进行分离纯化，适合奥沙西泮杂质Ⅱ较大规模的定向合成制备。

3 结论

本文提供了一种奥沙西泮杂质Ⅱ定向合成的制备方法。以奥沙西泮为原料制备奥沙西泮杂质Ⅱ，无需使用薄层色谱技术（PTLC）或液相制备柱技术进行分离纯化。制备得到的奥沙西泮杂质Ⅱ的纯度可以达到 99% 以上，适合于奥沙西泮杂质Ⅱ较大规模的定向合成制备。合成的杂质Ⅱ可以用于杂质的定性及定量分析，从而提高奥沙西泮的用药安全性。