白化黄喉拟水龟人工培育研究①

任镇明 任科明 任绍明 刘冰晶

(1 山月龟谷龟鳖饲养场 广东佛山528000;2 赣南医学院 江西赣州341000)

黄喉拟水龟（Mauremys mutica）隶属地龟科（Geoemydidae）拟水龟属（Mauremys）［1-3］，有中华亚种（M.m.mutica）和琉球亚种（M.m.kami）2个不同的亚种。中华亚种广泛分布于中国南方地区及越南北部，琉球亚种分布于琉球群岛西部的八重山列岛［4-6］。黄喉拟水龟是我国名优水产，也是本草纲目记载的12 种龟鳖类中药之一，被广泛养殖，至2007年，我国饲养量就近千万只［7］。

白化是生命体中的黑色素细胞缺乏酪氨酸酶，不能使酪氨酸变成黑色素，皮肤呈白色或浅红色，因为虹膜和脉络膜都不含色素，所以虹膜呈现红色，并且透明［8-9］。自然界中鲜见白化个体［10］。通常，经过人工选育，可以培育出少量白化动物个体［11-12］，但白化黄喉拟水龟的人工培育未见报道。山月龟谷饲养场于2000 年收购得到1 只成熟雌性白化黄喉拟水龟（P），试验拟通过杂交进行白化黄喉拟水龟人工繁育。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 母本与父本

母本为白化黄喉拟水龟（P），于2000 年9 月购自广州清平市场，约10 岁龄，背甲长21.8 cm，腹甲长19.8 cm，体重1 347 g。父本为黄喉拟水龟普通个体，由山月龟谷饲养场自繁自养，体色较浅，年龄9 岁，背甲长24.9 cm，腹甲长21.3 cm，体重1 204 g。普通黄喉拟水龟与白化黄喉拟水龟个体见图1。

1.1.2 饲养环境

饲养池为长方形白色PVC水池，面积1 m×2 m，其中水域面积1.5 m2，沙池0.5 m2，陆地建于水面之上，上部为陆地，下部为躲避洞，面积0.5 m2。水源为自来水，水位30 cm，水呈淡绿色，放养水浮莲，透明度30 cm左右。

1.2 方法

1.2.1 生物学观察及饲养

白化黄喉拟水龟（P）通体乳白色，盾片连接处为粉白色，头顶、尾正面、指甲和四肢鳞片为乳黄色，脸颊、尾和四肢腹面为白色。眼球及虹膜为血红色，并且透明。

白化黄喉拟水龟（P）水栖性强，白天多栖息在水中，晴天在陆地上晒太阳的时间少于普通个体。天气炎热时，躲在洞内避暑，活动较少。每年的4 月底至9 月底气温较高的时候，活动量和摄食量较大，投喂鲜鱼肉块，颗粒浮水饲料，以及葡萄、木瓜等水果。最适环境水温为25～30℃，每2～3 天投喂一次。20℃左右基本停食，15℃左右逐步进入冬眠，10℃左右进入深度冬眠。翌年3月底，水温15℃左右时逐渐苏醒，此时只爬动，不吃食，到4月份水温升至20℃左右才采食。

2 结果与分析

2.1 F1子代培育

将白化雌龟（P）与一只体色较浅的普通雄龟混养于饲养池，4～10 月底有交配现象，白化雌龟（P）于2001 年4 月24 日产卵6 枚，受精5 枚；5 月12 日产卵5 枚，全受精；6 月21 日产卵6 枚，5 枚受精。

2002年4月20日，白化雌龟（P）产卵6枚，5枚受精；5 月9 日产卵5 枚，全受精；5 月30 日产卵7枚，5枚受精；6月17日产卵5枚，全受精。

2003年4月22日，白化雌龟（P）产卵7枚，6枚受精；5 月5 日产卵5 枚，全受精；5 月29 日产卵7枚，5枚受精。

将受精卵平行摆放到蛭石中，每个间隔2 cm，保持孵化介质的湿度在9%左右，空气湿度80%～90%，温度28～30℃，孵化期55～60 d。卵呈白色，长椭圆形，长径41.2～44.3 mm，短径31.2～36.4 mm，重12～16.3 g。2001 年得苗13 只，3 雄10 雌；2002 年得苗17 只，5 雄12 雌；2003 年得苗14 只，4 雄10 雌。稚龟重7～11 g。2001～2003 年未得到白化个体。

2.2 F2子代培育

2003 年8 月，将白化雌龟（P）与F1 子代3 只雄龟中体色最淡的一只进行混养，弃去原普通雄龟。

白化雌龟（P）于2004 年4 月10 日产卵6 枚，受精3 枚；5 月13 日产卵5 枚，受精3 枚；6 月2 日产卵6枚，2枚受精。

2005年4月16日，白化雌龟（P）产卵4枚，3枚受精；5月7日产卵5枚，受精4枚；5月31日产卵5枚，4枚受精；6月16日产卵5枚，受精4枚。

2006年4月12日，白化雌龟（P）产卵7枚，6枚受精；5 月6 日产卵6 枚，全受精；6 月23 日产卵6枚，全受精。

将受精卵按照3.1 步骤进行孵化，2004 年得苗8 只，3 雄5 雌；2005 年得苗14 只，5 雄9 雌；2006 年得苗17 只，5 雄12 雌。2004～2006 年仍未得到白化个体。

2.3 F3子代培育

2006 年8 月，将白化雌龟（P）与2004 年培育的F2 子代3 只雄龟中体色最淡的一只进行混养，弃去原F1子代雄龟。

白化雌龟（P）于2007 年4 月5 日产卵7 枚，受精3 枚；4 月28 日产卵5 枚，受精3 枚；5 月22日 产 卵4 枚，3 枚 受 精；6 月18 日 产 卵6 枚，4 枚受精。

2008 年4 月8 日，白化雌龟（P）产卵6 枚，5枚受精；5月1日产卵5枚，受精4枚；5月22日产卵4枚，3枚受精；6月17日产卵5枚，受精3枚。

2009年4月6日，白化雌龟（P）产卵6枚，全受精；4 月21 日产卵7 枚，全受精；5 月16 日产卵7枚，6枚受精。

将受精卵按照3.1 步骤进行孵化，2007 年得苗13 只，3 雄10 雌，其中白化苗3 只，1 雄2 雌；2008 年得苗14 只，3 雄11 雌，其中白化苗4 只，1雄3 雌；2009 年得苗18 只，5 雄13 雌，其中白化苗4 只，2 雄2 雌。截止到2007 年F3 子代，终于得到白化个体，白化苗率为21.4%～28.8%。

2.4 F4子代培育

2.4.1 P×F3培育F4子代

2010 年8 月，将白化雌龟（P）与2007 年培育的F3 子代中的一只白化雄龟进行混养，弃去原F2子代雄龟。

2011 年4～6 月白化雌龟（P）共产卵4 次，总计21 枚，受精卵12 枚，得苗11 只，其中白化苗6只（2雄4雌）。

2012 年4～6 月白化雌龟（P）共产卵4 次，总计23 枚，受精卵18 枚，得苗17 只，其中白化苗9只（3雄6雌）。

2013 年4～6 月白化雌龟（P）共产卵4 次，总计22 枚，受精卵19 枚，得苗17 只，其中白化苗8只（2雄6雌）。

2.4.2 F3×F3培育F4子代

将2007 年，2008 年，2009 年获得的F3 子代白化苗分别饲养在3 个不同的饲养池中培育F4 子代，产卵数及得苗率见表1。

由表1可知，F4子代已经可以较稳定的繁育出白化个体。F3×F3 培育的F4 子代白化率为47.1%～54.5%，P×F3 培育的F4 子代白化率为48.4%～63.9%。由此可见，人工培育的F3 子代与亲本P 的白化基因数趋于相似。

表1 F4子代培育一览表

2.5 F5子代培育

2.5.1 同窝F4代培育F5代

将2013 年获得的2007 年F3 子代繁殖的F4 子代（图2），2008年F3子代繁殖的F4子代，取同窝1雄2雌，各取3组，共6组，将同窝个体分别放入6 个饲养池中培育F5 子代（图3），产卵数及得苗率见表2。

2.5.2 不同窝F4代培育F5代

将2013 年获得的2007 年F3 子代繁殖的F4 子代，2008 年F3 子代繁殖的F4 子代，各取3 雄6 雌，将2007 年F3 子代繁殖的F4 子代雄龟与2008 年F3子代繁殖的F4子代雌龟混养，将2008年F3子代繁殖的F4 子代雄龟与2007 年F3 子代繁殖的F4 子代雌龟混养，放入6 个饲养池中培育不同窝F5 子代，产卵数及得苗率见表2。

由表2 可知，同窝个体与不同窝个体产卵数，受精率较为接近，但白化苗率有很大差别，同窝个体2017 年，2018 年白化苗率为80.0%～95.8%，平均白化苗率大于85%，个别一窝白化苗率100%；不同窝个体白化苗率明显偏低，2017 年，2018 年白化苗率为61.5%～86.9%，明显低于同窝个体的白化苗率，而且白化苗率波动很大。

3 讨论与结论

3.1 讨论

3.1.1 子代数越大白化率越大

常染色体隐性遗传病、环境诱导的基因突变或近亲繁殖可能导致白化个体的出现［13，14］。白化种源不易获得。以2000 年获得的白化个体作为种源进行白化种群培育，发现在培育过程中，子代数越高，白化率就越高。

F1、F2 子代未见白化个体出现，F3 子代的白化率分别为21.4%～28.8%，F3×F3 培育的F4 子代白化率为47.1%～54.5%，P×F3 培育的F4 子代白化率为48.4%～63.9%，F4×F4 培育的F5 子代白化率为61.5%～95.8%，平均白化苗率大于85%，个别一窝白化苗率100%。从F1～F5，白化率明显的呈现出阶梯式增大，从F3 子代开始，每增加一个子代，其白化率增加20%～30%。

3.1.2 亲缘更近的亲本培育的子代白化率更大

近亲繁殖可能导致白化个体的出现［13，14］。以F5 为例，同窝与不同窝F4 个体繁殖的白化苗率有很大差别，同窝F4 个体培育的F5 子代白化苗率为80.0%～95.8%，平均白化苗率大于85%，个别一窝白化苗率100%；不同窝F4 个体培育的F5 子代白化苗率明显偏低，白化苗率为61.5%～86.9%，明显低于同窝F4 个体的白化苗率，而且白化苗率波动很大。由此推理，近亲的白化个体要比远亲的白化个体培育的子代白化率更大。

表2 F5子代培育一览表

3.1.3 白化个体与普通个体的比较

白化个体的成熟时间、生长速度、产卵窝数，产卵个数、产卵时间、发情/交配时间、受精率、孵化率与普通个体相同，无明显差异。一般2～3龄的雄龟即有繁殖能力，但受精率较低，4 龄的雌龟就可产卵，普通个体，F1～F5 年产卵数为20～28枚，5龄的雌龟普通个体，F1～F5子代产卵数为32 枚左右。无论雌雄龟，受精率与双方亲本的年龄都有关系，总体来看，2～3龄的雄龟配7龄以上完全成熟的雌龟，受精率在30%左右，若配4 龄刚刚成熟的雌龟则受精率极低，甚至无受精卵。同样，4 龄刚成熟的雌龟配6 龄以上成熟雄龟，受精率也在30%左右，若配2～3 龄的雄龟则无受精卵。由此可见，无论普通个体还是F1～F5子代雄龟2～3 龄有繁殖能力，6 龄以上完全成熟；雌龟4 龄可以产卵，7 龄以上完全成熟。在平常培育中尽量用完全成熟的雌雄个体作为亲本，若实在条件限制，则完全成熟壮年雄龟配刚成熟的雌龟或者完全成熟壮年雌龟配刚成熟的雄龟也可得到少量子代，弱嫩公配嫩母一般无法得到龟苗。

白化个体也会像普通个体上岸晒太阳，但时间少于普通个体，这可能与白化个体缺乏黑色素，无法长期抵挡大量的紫外线有关。

3.2 结论

自2000 年收购得到1 只成熟雌性白化黄喉拟水龟（P），经过五代18 批人工培育，可以稳定地获得白化黄喉拟水龟个体，子代数越大，白化率越大，第五代白化黄喉拟水龟的出苗率已经达到85%以上，个别一窝可达100%。亲缘近的的同窝个体繁殖的白化苗率大于不同窝的个体。总体看来，子代越大的个体眼球虹膜更红、更透明，这可能与其所带的白化基因数有关，将在后续的研究中报道出来。