罗丹明B荧光淬灭法在消毒液中过氧乙酸含量检测中的应用

李雪涛

（河南省南阳市中心医院 河南南阳 473000）

1 前言

过氧乙酸在环境消毒、食品消毒以及医疗器械灭菌等领域中被广泛应用。现阶段，用于测定过氧乙酸的方法有很多，其中，最常用的有电化学法、阻抑光度法及滴定法等。滴定法操作流程比较复杂，且有较多不稳定性因素[1]；阻抑光度法操作比较简单，但灵敏度较低；色谱法虽然有较高的选择性与灵敏度，但仪器成本较高，难以得到广泛普及；电化学法具有高稳定性，但重现性较差[2]。

罗丹明B又被称之为花粉红，是一种人工合成的燃料，呈现为桃红色，其稀释液荧光特性比较强烈。当前，罗丹明B荧光淬灭法凭借其效能优势，在分析氧化性物质的成分中得以应用。以罗丹明B碘化钾体系为基础，凭借其所具有的荧光光谱特性，对亚硝酸根、亚氯酸根等进行测定的报道较多，但在测定、分析过氧乙酸方面的报道并不多见[3]。本文基于罗丹明B-碘化钾-过氧乙酸架构，借助与之相对应的荧光光谱特性，探讨了一种采用罗丹明B荧光淬灭法对消毒液中过氧乙酸的实际含量进行测定的分析方法。

2 试验

2.1仪器与试剂分析

仪器：荧光分光光度计（930N型）；纯水机（UPH-1-20T）。

试剂：（1）取0.031mol/L过氧乙酸溶液，从中吸取8 mL浓度为16%的过氧乙酸溶液，将事先准备好的500 mL水加入其中，滴加高锰酸钾溶液（0.01 mol/L），使之呈红色，然后用碘量法进行标定，置于4℃冰箱中保存。（2）过氧乙酸标准溶液（1.0×10-4mol/L），采用标定液稀释过氧乙酸标准液至浓度为1.0×10-4mol/L。（3）过氧乙酸标准溶液。用水稀释过氧乙酸溶液，分别将其配制成浓度为 0、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0×10-6mol/L 以及 1.0、1.6、2.0、3.0、4.0、5.0 mol/L 的溶液。 （4）罗丹明 B 溶液（5.0×10-4mol/L），取 0.12 g罗丹明B，用纯化水溶解，并置于250 mL容量瓶中，定容。

2.2试验方法

取0.25 mL过氧乙酸标准溶液，加入10 mL纯化水，一边搅拌一边将高锰酸钾溶液（0.01 mol/L）加入其中，使之呈现为比较稳定的浅粉色，最后用纯化水稀释至500 mL，获得过氧乙酸待测液。将2.0 mL硫酸溶液（0.1 mol/L）、2.0 mL 碘化钾溶液（0.1 mol/L）以及1.0 mL过氧乙酸待测液分别加入50 mL容量瓶中，静置15 min后，加入5.0 mL罗丹明B标准溶液（5.0×10-4mol/L），充分混匀，然后用纯化水进行定容，依据仪器说明书进行测定。

3 结果与讨论

3.1 荧光光谱

依据特定的试验方法，在475~650 nm内，分别对罗丹明B-过氧乙酸-碘化钾-硫酸溶液、罗丹明B-碘化钾-硫酸溶液以及罗丹明B-碘化钾溶液进行扫描并绘制荧光光谱，详见图1。

图1 荧光光谱

试验将365nm当作激发波长，对580 nm位置处的荧光强度进行检测[5]。从图1可知，如果荧光激发波长为365 nm，罗丹明B于580 nm位置处荧光强度最大。对碘化钾溶液而言，无论是对峰位，还是对峰值，都没有明显影响。在硫酸介质中，羧基电离受到明显的抑制（罗丹明B），荧光强度较弱[4]；而在酸性混合液中（罗丹明B与碘化钾）加入过氧乙酸，其荧光强度呈现快速下降趋势。因此，造成荧光猝灭最关键的物质为过氧乙酸。另外，还需要强调的是，体系的荧光强度与过氧乙酸之间存在十分紧密的关联性。

3.2 选择试验条件

3.2.1 硫酸溶液用量

过氧乙酸是一种比较典型的含氧型氧化剂，处于酸性环境时易得电子，同时对稳定碘单质也有促进作用。如果过氧乙酸的浓度始终维持在8.0×10-6mol/L，硫酸溶液（0.1 mol/L）会对罗丹明B荧光强度产生影响。不断增加硫酸溶液的体积，罗丹明B所对应的荧光强度呈现出不断减小的趋势；若硫酸溶液所对应的体积为2.0 mL，罗丹明B的荧光强度较低；若持续增加硫酸溶液，罗丹明B所对应的荧光强度保持稳定，详见图2。

图2 硫酸溶液的体积对罗丹明B荧光强度所产生的影响

3.2.2 碘化钾溶液用量

在过氧乙酸所对应的浓度为8.0×10-6mol/L时，研究0.1 mol/L碘化钾溶液的用量对体系荧光强度所产生的影响，结果显示，随着碘化钾溶液实际用量的不断增加，体系所对应的荧光强度呈现不断减小的趋势[6，7]。如果0.1mol/L碘化钾溶液的用量超过0.8 mL，体系的荧光强度较低且比较稳定。

3.3 样品分析

依据该方法对3种来源不同的样品实施深入分析，并开展加标回收试验操作，结果显示，回收率可达96.5%~97.5%，总量的标准偏差是1.3%~2.5%[8]。经检测所得3个样品所对应的过氧乙酸含量均符合其标示量。受过氧乙酸标准溶液所存在的不稳定性的综合影响，最终经检测所得的回收率都小于100%。

4 结语

综上所述，依据罗丹明B荧光猝灭法对3种来源不同的样品实施深入分析并开展加标回收试验操作。结果显示，回收率可达96.5%~97.5%，总量的标准偏差是1.3%~2.5%。经检测所得3个样品所对应的过氧乙酸含量都符合其标示量。受过氧乙酸标准溶液的不稳定性的综合影响，最终经检测所得的回收率都＜100%。由此可知，采用罗丹明B荧光猝灭法能够准确测出消毒液中的过氧乙酸含量。