哮喘小鼠脾细胞中粒细胞型髓源性抑制细胞和Th17细胞水平的变化

薛菲，余孟珠，单文琪，卢红艳，汪雪峰

(江苏大学附属医院 1. 儿科; 2. 中心实验室，江苏 镇江 212001)

支气管哮喘是一种以慢性气道炎症为特征的异质性疾病。目前公认的机制是由于辅助性T细胞(help T cell，Th)失衡所导致的，其中Th1降低、Th2增高而引起Th1/Th2失衡，Th2可激活B细胞产生免疫球蛋白 E(immunoglobulin E，IgE)并介导嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞、肥大细胞等诱发Ⅱ型超敏反应和气道炎症。此外，Th17/调节性T细胞(regulatory T cell，Treg)失衡在哮喘的发生发展中起着重要作用[1]。由于哮喘机制复杂，目前尚不清楚Th17/Treg失衡是如何参与哮喘的发生发展。髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)是由不成熟的髓系细胞组成的异质性细胞群[2]。MDSCs在小鼠中可被分为两个亚群，分别为粒细胞型MDSCs(granulocytic MDSCs，G-MDSCs)，表型为CD11b+Ly6G+Ly6Clow及单核细胞型MDSCs (monocytic MDSCs，M-MDSCs)，其表型为CD11b+Ly6G-Ly6Chigh[3]。本课题组前期研究发现哮喘患儿外周血中的MDSCs与Th17呈正相关[4]。本研究分析Th17、Treg及MDSCs细胞在实验性哮喘小鼠脾细胞中水平的变化及肺组织中相关细胞因子的表达情况，从而初步探索其在哮喘发生发展中所发挥的作用。

1 材料与方法

1.1 主要材料

6～8周龄SPF级雄性BALB/c小鼠(18～20 g)购自扬州大学比较医学中心，许可证号为SCXK(苏)2017- 0007，在江苏大学动物实验中心SPF级饲养。Ⅱ级和Ⅴ级卵清蛋白(ovalbumin，OVA)均为美国Sigma公司产品；山羊抗小鼠IgE、免疫组化IL-17抗体(英国Abcam公司)；抗山羊第二抗体和PMA/Ionomycin及BFA/Monensin购于中国联科生物；流式抗体FITC-CD11b、APC-Ly6G、PE-Ly6C、PE-IL-17、免疫组化骨髓分化抗原(Gr-1)抗体(美国BioLegend公司)；FITC-CD4、免疫组化叉头样转录因子3(Foxp3)抗体，破膜固定液(美国eBioscience公司)；小鼠Treg试剂盒(美国Thermo公司)。

1.2 哮喘小鼠模型建立

将小鼠随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)组和模型组，每组6只。……