非编码RNA GlmY对伤寒沙门菌生物膜形成的影响

李雪，赵昕，靳梦彤，唐浩，张盈，黄新祥

(1. 江苏大学医学院，江苏 镇江 212013； 2. 南京市第一医院核医学科，江苏 南京 210006)

伤寒沙门菌(Salmonellaentericaserovar Typhi,S. Typhi)是一种以人类为唯一宿主的肠道致病菌，主要通过受污染的食物或水经消化道入侵人体，突破免疫防御引起全身性感染(伤寒)[1- 2]。S. Typhi可黏附在某些非生物固体甚至人体胆石表面，形成大量高度组织化、系统化的细菌群落——生物膜，该膜结构的形成能够使细菌抵抗环境压力和抗生素，并逃避宿主免疫系统的攻击，增强其在宿主体外的传播持久性及体内定植[3]。生物膜的形成受到庞大而复杂的调控网络控制，包括许多转录和转录后调控因子，例如双组分调节体系，σ因子和非编码RNA等[4- 5]。

RNA不具有编码功能，广泛存在于各种微生物及动植物。多种细菌中均已鉴定出多种具有调控作用的非编码RNA(ncRNA)[6]，它们大多通过与对侧或远端靶mRNA形成完全或不完全碱基配对的方式来发挥作用[7-8]。本课题组前期利用RNA-seq技术对生物膜及浮游状态的S. Typhi进行转录组分析，发现ncRNA GlmY在生物膜中的表达水平明显高于浮游菌(尚未发表)。GlmY可与ncRNA GlmZ 协同作用来调节胞内葡萄糖胺-6-磷酸的含量[9],但其在细菌生物膜形成中的作用尚未可知，因此本研究拟探讨GlmY对S. Typhi生物膜形成的影响及其作用机制。

1 材料与方法

1.1 菌株和质粒

伤寒沙门菌野生株S. Typhi GIFU10007、E.coliλ372和自杀质粒pGMB151由日本岐阜大学医学院微生物学教研室馈赠；E.coliDH5α、glmY缺陷株、回补株、空质粒对照株由本实验室制备或保存；pBAD/myc-HisA为美国Promega公司产品。

1.2 主要试剂与仪器

胰蛋白胨、酵母提取物、琼脂粉(德国Oxoid公司)；……