益生菌对肠易激综合征大鼠内脏高敏感性的作用以及肥大细胞-PAR2-TRPV1通路的影响

田徐露 ,蓝 程,田小兰,崔晓燕 ,王太昊

0 引言

肠易激综合征(Irritable bowel syndrome，IBS)是一种持续发作或间歇性发作的功能性胃肠疾病，具有临床表现多样、发病机制复杂、影响因素众多、病情迁延难愈等特点[1]。近年来，越来越多的证据证实，肠道菌群失调与IBS患者内脏高敏感性、免疫状态低下等因素有关[2]。根据多项指南推荐，益生菌可用于IBS的预防和/或治疗[3]，但是其具体的作用机制尚不明确。Kasakura等[4]发现,益生菌可与肥大细胞表面Toll样受体结合，抑制肥大细胞(Mast cell，MC)活化脱颗粒。MC活化与组胺、5-羟色胺等活性物质的释放有关，是介导内脏高敏感性的重要因素[5]。本研究旨在探讨双歧杆菌对IBS大鼠模型内脏高敏感性的影响，以及通过调节蛋白酶激活受体2(Protease activated receptor 2，PAR2)-瞬时感受器电位香草酸受体1(Transient receptor potential vanilloid subfamily member 1，TRPV1)轴抑制MC活化的可能机制，为深入阐述益生菌治疗IBS的作用机制提供新的研究思路。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 双歧杆菌三联活菌胶囊购自上海信谊药厂有限公司，国药准字S10950032，规格：0.21 g/粒，含活菌数≥1.0×107CFU，批号：04720170927，4 ℃保存备用。临用前以2 ml生理盐水溶解。5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)、P物质(Substance P，SP)、促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin releasing hormone，CRH)、白细胞介素(Interleukin，IL)-10、IL-12酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒购自上海康朗生物科技有限公司；兔抗鼠PAR2单克隆抗体、兔抗鼠TRPV1多克隆抗体、辣根酶标记荧光二抗购自美国Santa Cruz Biotechnology公司；GenElut粪便DNA分离试剂盒、PCR引物、实时荧光定量PCR试剂盒、抑肽酶均购自美国Sigma公司。

1.2 实验动物和分组 30只健康雄性SD大鼠，清洁级，(180±20)g，来源于遵义医学院[许可证号：SCXK(黔)2018-0002]，饲以无菌颗粒饲料，自由饮水。适应性饲养1周后，称量大鼠体重，按照随机数字表法将受试大鼠随机分为3组：空白组、模型组和益生菌组，每组10只。……