SIRPα-GFP 真核表达载体构建及其在HEK293T 细胞中的表达

王明月,王浩,王冬梅,杨泽斌,崔梅英,刘宁,黄莉莉,关新刚

（北华大学医学技术学院肿瘤靶向治疗重点实验室，吉林 吉林 132013）

信号调节蛋白α（signal regulatory protein-α，SIRPα），也被称为CD172a 或SHPS-1，是属于免疫球蛋白超家族中的一种膜蛋白，是一种在巨噬细胞、树突状细胞和中性粒细胞等髓系细胞上表达的抑制性受体分子［1］。CD47 是SIRPα 的天然配体，在多种生理病理过程中均发挥作用［2-4］。正常的血液系统细胞表面均有CD47 表达，CD47-SIRPα 通路在红细胞老化吞噬过程中发挥作用［5］。SIRPα 作为巨噬细胞上的关键免疫抑制受体，与SIRPα 配体CD47 的相互作用可阻止自体吞噬作用，因此可以利用CD47 与SIRPα 识别抑制巨噬细胞的吞噬作用和移植排斥反应［6-7］。SIRPα 除在巨噬细胞表面表达外，还在中性粒细胞的表面呈高水平表达，多种肿瘤中CD47 分子呈高水平表达，巨噬细胞和中性粒细胞表面的SIRPα 与其识别结合后，会介导免疫抑制，发生免疫逃逸，从而促进肿瘤的发展［8-9］。CD47-SIRPα 信号通路为肿瘤治疗提供了新的思路，通过阻断CD47-SIRPα 信号通路激活吞噬细胞对肿瘤的吞噬，增强肿瘤抗原递呈，引发机体抗肿瘤免疫反应，杀伤肿瘤细胞［10-11］。本研究通过构建融合表达绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的SIRPα 真核表达载体，制备稳定表达SIRPα-GFP 的HEK293T 细胞系，并研究SIRPα-GFP 在细胞中的表达定位，为后续SIRPα的功能研究以及CD47-SIRPα 信号通路阻断研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 细胞、主要试剂和仪器HEK293T 细胞为本实验室冻存。培养基购自美国Hyclone 公司，胎牛血清购自杭州四季青公司，pLenti-C-mGFP 质粒和pCMV6-SIRPα 质粒购自美国Origene 公司，MluⅠ和SgfⅠ限制性内切酶购自……