胶原诱导性关节炎小鼠脾脏树突状细胞的检测及意义*

范友羊， 刘俊， 周海燕， 曾家顺， 李龙*

(1.贵州医科大学附属医院 肾病风湿科， 贵州 贵阳 550004； 2.贵州医科大学附属医院 临床医学研究中心， 贵州 贵阳 550004)

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种慢性自身免疫性疾病，主要以关节滑膜炎症为主要病理改变[1]。全球RA的发病率为0.5%～1%，我国大约为0.42%，目前RA患病的人数仍在增加[2]。研究RA最为常用的动物模型是胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis，CIA)模型，其原因为CIA在临床症状和病理表现方面与人RA非常相似[3]。树突状细胞(dendritic cell，DC)是体内最强大的专职抗原呈递细胞(antigen presenting cell，APC)，也是唯一能激活初始型T淋巴细胞的抗原提呈细胞，在T细胞参与的细胞免疫反应中起重要的作用[4]。研究表明，DC的亚群和功能状态可以直接影响初始T细胞分化为具有不同功能的抗原特异性T细胞的过程[4]。本研究拟通过建立CIA模型，采用流式细胞术检测脾脏淋巴组织驻留型经典DC(conventional DC，cDC)及其各亚群的比例，分析这些指标与CIA疾病的相关性。

1 材料与方法

1.1 实验动物、主要试剂及仪器

SPF级近交系DBA/l小鼠12只，雄性，6～8周龄，购于上海斯莱克实验动物有限公司，许可证编号SCXK2017-0005。鸡Ⅱ型胶原(chicken collagen type Ⅱ，CⅡ)和完全弗氏佐剂(Sigma公司)，APC-cy7标记抗小鼠CD3e抗体、BV421标记抗小鼠CD4抗体、PerCP-Cy5.5标记抗小鼠CD8a 抗体、PE-cy7标记抗小鼠CD19抗体、PE-CF594标记抗小鼠CD11c抗体、BB515标记抗小鼠 I-A/I-E抗体、组织脱水机、石蜡包埋机、手动切片机及光学显微镜(德国徕卡)，冷冻离心机(美国赛默飞世尔公司)。

1.2 方法

1．2．1分组及小鼠CIA模型的建立 将12只雄性DBA/l小鼠分为正常组(n=6)和模型组(n=6)，模型组小鼠参照经典的CIA模型方法[5]，将CⅡ与弗氏完全佐剂1 ∶1等比例混合，置于冰浴，注射器反复抽吸、充分研磨至完全乳化，取完全乳化剂0.1 mL在小鼠尾根部多点皮内注射。……