影响鸡新城疫HI 抗体检测结果因素分析

阎晓红

（山西省畜牧兽医学校 030024）

新城疫又称为亚洲鸡瘟，是由新城疫病毒引起鸡和火鸡的急性、高度接触性传染病，是严重危害家禽的重要传染病之一，在我国被列为一类传染病。实际中，常检测鸡群新城疫抗体水平了解鸡群的健康状况，从而判断接种疫苗之后机体的保护力。红细胞血凝抑制试验（HI） 可简单、快速检测出新城疫的免疫状态，多种因素影响检疫结果的准确性，常见影响因素有以下几种。

1 试验材料

1.1 抗原

抗原是影响新城疫检测结果的主要因素之一，抗原不新鲜或过期时会使红细胞的凝集能力下降，所以，检测鸡群抗体水平时要用新鲜抗原。

1.2 红细胞悬液

在HI 试验中常使用1%的红细胞悬液，一定要配制准确，否则会影响检测结果。如果红细胞悬液的浓度较大，测出的HI值相对较小；如果红细胞悬液的浓度较小，测出的HI 值相对较大[1]。用5ml 一次性采血器抽取0.5ml 抗凝剂，在翅静脉采血2.5ml 血液，两者混合后注入离心管中进行离心，用移液器将离心管中的上清液和白细胞弃去，向沉淀的红细胞泥中加入PBS 液反复吹打洗涤，再次离心，重复上述操作3 次，最后准确制备好1%的红细胞悬液。在吸取红细胞泥配制红细胞悬液时，红细胞泥不能过多，否则会使红细胞液浓度变大，影响检测结果。

1.3 被检血清

正常的动物血清清亮、淡黄色，无异味。如果被检血清陈旧、溶血或变质会影响检测结果，所以操作每批样品时都应用生理盐水和标准阳性血清、标准阴性血清对照，以防判定结果出现偏差。

2 仪器的清洁及正确使用

2.1 反应板

HI 抗体检测时，96 孔V 型反应板底部应干净、清洁，没有沉淀物。首先用1%的盐酸溶液浸泡，再用1%的火碱溶液浸泡，接下来用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水浸泡烘干方可使用。从浸泡到烘干整个过程需24h 以上。

2.2 移液器

在HI 试验过程中，移液器使用不当会使移液量不准确，发生移液量不足或排出不够，造成检测结果的误差。所以在移液前要认真挑选吸头，选择移液器与吸头安装紧密、没有变形的吸头。并且在液体中不断吸排，选择吸头内不残留液体者为佳。移液器吸取液体时应做到“慢吸快打”，即在吸液时要慢而准，排出液体时对准后排出速度快，这样可保证打入的液体量一致，避免排出后吸头内残留有液体，影响结果。同时移液器吸液时应垂直吸液，吸头尖端离液面约3mm，吸液时按到第一档，慢慢放开按钮；放液时快速按下第一档、第二档，排出液体。

2.3 离心机

血清离心时，先将离心机放置在平稳处，打开电源，调节好转速和离心时间，再将装有血液的离心管放入。要求离心管内的液体不能太满，离心管对称放入并保持平衡。离心时要控制离心时间和离心速度，一般转速为2000～3000/min，离心时间为5～10min/次[2]。

3 环境温度

血凝抑制试验反应的最佳温度是25℃。

4 结果判定时间

反应时间结束后立即将96 孔反应板竖起读取结果，并迅速记下结果。一般来说，阳性对照、阴性对照成立，红细胞对照孔完全沉淀的前后5min 内判定试验结果较好。

总之，在新城疫抗体水平检测过程中，需要严格按照规定进行操作，从使用器具的清洗、试剂配制到整个操作过程都要认真、细心，做到一丝不苟，避免干扰，不断总结经验，发现问题及时改正，才能保证试验结果的准确无误，更好地指导生产实际。