血清补体C1q、视锥蛋白样蛋白-1在急性缺血性脑卒中诊断及病情评估中的价值

刘立斌，张雷，吴妍，李影，王培蕊

1北京市大兴区人民医院，北京 102600；2北京大学首钢医院

急性缺血性脑卒中(AIS)是一种常见急症，在全球范围内有较高的致残率和致死率[1]。AIS发病机制复杂，目前普遍认为免疫因素和炎症反应在AIS发生发展中起重要作用[2]。补体是一组活化后具有酶活性的蛋白质，存在于人体的血清和组织液中，是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件，同时，补体亦可通过介导机体炎症导致组织损伤[3]。既往已有研究发现[4]，缺血再灌注损伤大鼠脑组织中补体C1q与C3c沉积。视锥蛋白样蛋白-1(VILIP-1)是一种钙传导蛋白，其通过神经元的钙依赖型信号系统进行细胞信号传导[5]。研究[6]发现，VILIP-1在脑卒中患者血清中有升高现象，说明VILIP-1在脑卒中的病理过程中起到一定作用。本研究检测AIS患者血清补体C1q、VILIP-1水平，并探讨其与患者病情的关系，以期为临床AIS的诊断提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2017年4月～2019年4月北京市大兴区人民医院收治的98例AIS患者作为研究组。纳入标准：①患者均经CT或MRI检查证实为AIS，且符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2014》[7]；②年龄≥50岁；③发病至入院时间≤48 h；④AIS均为首次发作。排除标准：①合并免疫系统性疾病者；②合并急、慢性感染者；③合并心、肝、肾功能障碍者；④合并恶性肿瘤者；⑤出血性脑卒中；⑥入院前服用过可能影响本研究结果的药物。研究组男55例、女43例，年龄50～78(63.49±5.14)岁，体质量指数(BMI)22.3～26.9(24.67±0.75)kg/m2；合并症：糖尿病21例，高血压32例。另选取同期于北京市大兴区人民医院体检健康的100例志愿者作为对照组，其中男58例、女42例，年龄53～77(63.04±5.32)岁，BMI 22.6～27.2(24.51±0.90)kg/m2。两组性别、年龄、BMI比较差异无统计学意义(P均>0.05)。所有研究对象对本研究知情并签署知情同意书。本研究经北京市大兴区人民医院伦理学委员会批准进行。

1.2 血清补体C1q、VILIP-1检测 对照组于体检当日，研究组于入院时，分别采集两组空腹静脉血5 mL，3 000 r/min离心6 min,分离血清，离心半径6 cm，将血清置于-20 ℃保存待测。采用西门子ADVIA 2400全自动生化分析仪，通过免疫透射比浊法测定血清补体C1q水平，试剂盒由上海北加生化试剂有限公司提供；采用酶联免疫吸附法测定血清VILIP-1水平，操作均严格按照试剂盒(上海西唐生物科技有限公司)说明书进行。

1.3 神经功能缺损程度评价 研究组入选对象入组后，采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分[8]评价神经功能缺损程度。总分42分，分数越高提示神经功能缺损越严重。根据NIHSS评分范围分为轻度缺损(NIHSS评分<7分)、中度缺损(NIHSS评分7～15分)、重度缺损(NIHSS评分>15分)。

1.4 脑梗死面积测算 研究组入选对象入组后，采用Lightspeed VCT 64排螺旋CT(美国GE公司)进行头颅CT检测，采用机械系统动力学自动分析方法测量患者的脑梗死面积，根据梗死灶大小分为小面积脑梗死(直径≤1.5 cm)、中面积脑梗死(1.5 cm<直径≤4 cm)、大面积脑梗死(直径>4 cm)[9]。

2 结果

2.1 两组血清补体C1q、VILIP-1水平比较 研究组与对照组血清补体C1q水平分别为(174.18±22.48)、(161.22±21.46)mg/L，VILIP-1水平分别为(8.02±2.24)、(0.79±0.32)μg/L，研究组血清补体C1q、VILIP-1水平高于对照组(t分别为4.150、31.947，P均=0.000)。

2.2 不同神经功能缺损程度患者血清补体C1q、VILIP-1水平比较 研究组轻度缺损34例，中度缺损35例，重度缺损29例。轻度缺损、中度缺损、重度缺损者血清补体C1q水平分别为(163.42±15.54)、(176.29±14.93)、(184.25±16.74)mg/L，VILIP-1水平分别为(4.52±0.74)、(7.73±1.25)、(12.49±2.18)μg/L，随着神经功能缺损程度的加重，AIS患者血清补体C1q、VILIP-1水平逐渐升高(P均<0.05)。

2.3 不同脑梗死面积患者血清补体C1q、VILIP-1水平比较 研究组小面积脑梗死29例，中面积脑梗死43例，大面积脑梗死26例。小面积脑梗死、中面积脑梗死、大面积脑梗死者血清补体C1q水平分别为(161.32±14.37)、(173.44±15.14)、(189.76±17.25)mg/L，VILIP-1水平分别为(4.18±0.68)、(6.92±1.15)、(14.14±2.34)μg/L，随着脑梗死面积的增大，AIS患者血清补体C1q、VILIP-1水平逐渐升高(P均<0.05)。

2.4 研究组血清补体C1q、VILIP-1水平与NIHSS评分和脑梗死面积的相关性 Pearson相关分析结果显示，血清补体C1q、VILIP-1水平与NIHSS评分均呈正相关(r分别为0.475、0.584，P均<0.05)，血清补体C1q、VILIP-1水平与脑梗死面积均呈正相关(r分别为0.514、0.632，P均<0.05)。

2.5 血清补体C1q、VILIP-1对AIS的诊断价值 ROC曲线分析结果显示，血清补体C1q诊断AIS的曲线下面积(AUC)为0.674(95%CI：0.582～0.747),最佳诊断临界值为169.34 mg/L，灵敏度为71.62%，特异度为63.46%；VILIP-1诊断AIS的AUC为0.714(95%CI：0.619～0.832)，最佳诊断临界值为4.35 μg/L，灵敏度为75.83%，特异度为66.94%。

3 讨论

脑卒中是严重危害我国人民生命健康的主要疾病之一，《中国心血管病报告2017》数据表明[10]，我国目前约有脑卒中患者1 300万人，脑卒中每年发病率、病死率分别为246.8/10万人、114.8/10万人。AIS占全部脑卒中的60%～80%，是脑卒中最常见的类型。临床对于AIS强调早期诊断、早期治疗、早期康复和早期预防其复发[11]，但作为目前AIS主要诊断方法的CT、MRI等影像学技术的诊断效果欠佳，约有40%的患者无法得到快速有效的诊断[12]。因此，寻找敏感有效的血清标志物成为众多医学工作者探寻的热点。

补体可介导免疫溶菌、溶血作用，在维持免疫耐受和内环境自稳中有重要作用，是机体面对外来侵害的第一道防护机制[13]。C1q可与抗原-抗体复合物结合并改变其结构，并在级联激活反应作用下形成攻膜复合物，从而在补体激活的经典途径中发挥起始分子的作用[14]。脑内的补体系统在正常情况下处于平衡状态，血脑屏障遭到破坏后，血浆补体进入脑内与脑磷脂、抗磷脂抗体等抗原物质接触形成抗原-抗体复合物，通过经典途径激活补体。脑缺血发生时，缺血区出现离子浓度和pH值变化，这些变化可致补体调节因子减少或缺失，进而使得补体激活增加，同时脑缺血引起的脑内毛细血管内皮细胞破坏，还可引起与C1q结构类似的甘露糖结合凝集素(MBL)沉积，通过MBL途径激活补体[15]。补体系统活化，也成为缺血性脑血管病发病机制中重要的一环。近期研究[16]表明，血清补体C1q水平与脑梗死的发生密切相关，是AIS发作的独立危险因素。

VILIP-1属于神经元钙传感蛋白视锥蛋白/恢复蛋白家族，其主要通过与Ca2+结合发生不同的结构变化，引发下游网络中信号分子改变，传导不同的下游信号[17]。VILIP-1可通过影响β-淀粉样蛋白(Aβ)的沉积和tau蛋白的磷酸化来影响神经退行性疾病的进程[18]。AIS造成的神经损害是一个持续性过程，Aβ的沉积和tau蛋白的磷酸化均可导致细胞毒性的产生，由于VILIP-1参与到这一过程中，所以表达VILIP-1的神经元细胞更易受损，导致生理功能缺失，VILIP-1在这一损伤过程被释放入血，其水平升高对于神经损伤的诊断有重要意义[19]。有研究[20]表明，高水平的VILIP-1与脑梗死后认知记忆障碍密切相关，能较好地预测血管性痴呆。

本研究发现，AIS患者血清补体C1q、VILIP-1水平升高，同时血清补体C1q、VILIP-1水平随着患者神经功能缺损程度和脑梗死面积的增加而升高，证实补体C1q、VILIP-1在AIS的发生发展中起到重要作用。进一步研究表明，血清补体C1q、VILIP-1水平与NIHSS评分和脑梗死面积均呈正相关，提示补体C1q、VILIP-1水平或可成为诊断AIS患者病情的血清标志物。ROC曲线分析结果显示，血清补体C1q诊断AIS的AUC为0.674(95%CI：0.582～0.747),最佳诊断临界值为169.34 mg/L，灵敏度为71.62%，特异度为63.46%；VILIP-1诊断AIS的AUC为0.714(95%CI：0.619～0.832)，最佳诊断临界值为4.35 μg/L，灵敏度为75.83%，特异度为66.94%。表明补体C1q、VILIP-1对于AIS有较好的诊断价值。

综上所述，AIS患者血清补体C1q、VILIP-1水平升高，其水平与NIHSS评分和脑梗死面积均呈正相关。血清补体C1q、VILIP-1水平可作为AIS患者病情诊断的辅助指标。值得注意的是血清补体C1q、VILIP-1水平会随着发病时间的变化呈现明显波动，本研究选取了发病时间较为集中的病例进行研究，今后我们将进一步观察AIS患者发病后不同时间段的血清补体C1q、VILIP-1水平，以提供更为可靠的数据参考。