渗透压选择性裂解法在MALDI-TOF MS直接鉴定血培养阳性标本中的应用

张丽娜，陈莎，杨柳，胡成进(.杭州迪安医学检验中心，杭州 3003；.解放军第九六〇医院检验科，济南 50000)

血流感染(blood stream infection，BSI)具有较高发病率和死亡率，我国院内BSI致死率可高达30%～40%[1]。据文献报道，BSI病原菌鉴定报告时间每延迟1 h，患者存活率降低7.6%[2-3]。因此，准确快速鉴定病原菌及合理的抗菌药物治疗对于BSI患者的生存率和预后极其关键。目前，BSI诊断的金标准依然是血培养，而实验室传统方法是阳性血培养标本分离培养出单克隆菌落后进行生化鉴定和药敏试验，一般耗时48～72 h，极大地延迟血培养阳性结果的报告时间，从而可能耽误患者的后续治疗。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS)是一种近年来发展的新技术，可用于微生物病原菌的鉴定，已成为国内外学者研究的热点之一。本研究尝试使用渗透压选择性裂解法直接用于MALDI-TOF MS检测，可极大地缩短血培养阳性周转时间(turn-around time，TAT)，为临床抗感染治疗提供可靠依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2018年12月至2019年3月杭州迪安医学检验中心微生物室送检的阳性血培养瓶179例，剔除同一患者短时间送检的多套血培养标本。

1.2仪器与试剂 Vitek 2 compact全自动微生物分析系统及配套鉴定卡、Bact/ALERT3D全自动血培养仪(法国生物梅里埃公司)，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪及基质α-氰基-4-羟基肉桂酸(HCCA)(珠海美华公司)，甲酸、乙腈、三氟乙酸(Sigma公司)，快速革兰染液(珠海贝索公司)，血琼脂平板、麦康凯平板、巧克力平板(郑州博赛公司)。

1.3方法

1.3.1血培养涂片染色镜检 血培养仪阳性报警后，取出血培养阳性报警瓶抽取培养液涂片行革兰染色，记录镜检结果，排除假阳性干扰。……