甲状腺激素免疫学检测研究的新进展

肖立娇（天津市北辰医院,天津 300400）

1 概述

RIA技术的发展主要分为五代，第一代为Yalow、Berson创建，主要应用了竞争抑制免疫反应原理，使医学检验史进入了新纪元；第二代的主要标志为游离标记抗原分离技术、抗原-抗体复合物；第三代的主要标志为半抗原制备抗体技术；第四代的主要标志为单克隆技术、固相载体材料；第五代的主要标志为抗体固相化，为全自动分析打下了基础[1]。此外，以RIA理论为基础，还陆续出现了电化学发光免疫法（ECLIA）、酶联免疫分析法（EIA）等检测分析技术，不仅提高了检测灵敏度、特异性，且制备简易、无污染、有效期长、自动化程度高，在临床上得到了广泛的应用[2]。

2 免疫学检测方法分析

2.1 RIA技术 RIA技术为1959年由Yalow等人建立，成为临床检验及定量分析的革命性技术，为生物医学发展做出了重要贡献。RIA主要通过对抗原或抗体应用放射性核素标记，并使其与待测抗原或抗体结合，检测其复合物。目前，国内部分实验室仍应用RIA试剂盒进行游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺激素（TSH）等指标测定[3]。该检测方法不仅灵敏度、特异性高，且精密度好，对多种微量蛋白、激素、肿瘤标志物均能进行准确检测[4-5]。同时，由于其设备要求不高、操作简单、成本低廉，因此，它是基层医疗机构应用最多的超微量物质检测方法，也是部分激素检测的“金标准”。但该检测方法也存在一定不足，主要表现为自动化程度低、试剂盒不易储存、放射性污染等，因此，该技术也逐渐被其他新检测技术所取代[6]。

2.2 EIA技术 EIA技术最早出现于1966年，在酶的高效催化作用下，促使抗原和抗体特异性免疫反应，并使用特定的酶标记，形成可用于示踪的免疫酶，通过观察其显色程度，对待测物进行分析。与RIA技术相比，EIA技术不仅设备简单，操作安全，同时也克服了其放射性污染的问题。但该技术测量范围窄、酶稳定性不足、不易定量分析、灵敏度偏低，因此限制了其临床应用。直到1971年，有学者对EIA技术进行了改进，使用酶代替核素标记，即酶联免疫吸附试验（ELISA），该技术的特点在于操作简单、稳定性及安全性好、灵敏度及特异度高、自动化程度高[7]。有研究利用ELISA法进行抗甲状腺过氧化物酶抗体的定量分析，结果显示灵敏度、特异度较高，适合基层实验室应用[8]。也有学者对比了化学发光免疫分析（CLIA）与ELISA在检测促甲状腺素受体抗体方面的价值，结果并无明显差异，但认为与ELISA相比，CLIA的重复性更好，检测速度更快，自动化程度更高，且检测范围较宽[9]。ELISA虽然设备要求不高，成本低廉，但操作相对较为繁琐，自动化程度低于CLIA。

2.3 CLIA技术 CLIA技术最早出现于1977年，是基于RIA原理形成的检测技术，将高特异性免疫反应以及高灵敏化学发光有机结合。早期CLIA的检测特异度与RIA相当，但灵敏度偏低，主要是由于光信号持续时间限制，无法满足检测需求。直至90年代，发光稳定剂的应用，使发光信号持续时间延长，可达到20-30min，使其临床应用价值明显提高。1990年，电化学发光反应系统建立，使其正式成为新一代标记免疫测定技术。有研究对比了ECLIA、ELISA对TSH 的检测结果，结果显示两者检测的结果高度相关，但与ELISA相比，ECLIA的准确度、精密度、线性范围更佳。有研究分别应用CLIA、RIA检测甲状腺球蛋白含量，结果显示与RIA相比，CLIA的特异度、灵敏度、符合率更高，诊断价值明显高于RIA[10]。同时，CLIA技术还避免了RIA的放射性污染问题，且试剂有效期更长，是目前超微量检测的主要方法。

除此之外，CLIA可应用智能化操作程序，具有操作灵活、随到随检、自动化程度高等特点，使检测效果明显提高。以往有研究在不同孕期、非孕期女性血清甲状腺激素水平检测中应用了CLIA技术，结果显示不同孕期、非孕期女性差异明显，提示其可用于孕期甲状腺疾病的早期筛查及诊断，对改善母婴结局具有积极意义[11]。

2.4 化学发光酶联免疫分析（CLEIA） CLEIA也是一种酶免疫分析法，其反应底物为发光剂，操作方法基本与EIA相同。在发光系统中，应用了萤火虫等荧光素，使发光信号明显增强，且能够在一定时间内维持稳定，使检测的灵敏度、准确性均明显提高。同时，该技术与同位素标记技术相似，但可能获得更佳的检测结果，因此，在部分实验室中已经逐步替代了RIA[12-13]。有学者对甲状腺功能亢进（甲亢）患者应用了CLEIA法检测，并与健康人群对比，结果显示甲亢患者的TT3、TT4、TSH 水平均明显高于健康人群，可用于判断甲亢病情[14]。

2.5 其他检测技术 除以上检测技术外，时间分辨荧光免疫测定法（TRFIA）、ECLIA等也在临床上得到较多应用，其中，TRFIA是一种特殊分析技术，充分利用了荧光波长、激发波长的差异，提高了检测的灵敏性[15]。有学者认为，TRFIA是现阶段最灵敏的微量检测技术，具有广泛的应用前景[16]。而ECLIA为新一代免疫标记技术，综合了免疫分析、磁微粒技术、生物素-亲和素、电化学发光等技术，具有精密度高、回收率高、快速稳定等特点，更适合用于现代医院的临床检测。

3 结束语

目前可用于甲状腺激素检测的免疫学检测技术较多，从早期的RIA技术、EIA技术、CLIA技术，到CLEIA、TRFIA、ECLIA等新型检测技术，其检测灵敏度、特异度明显提高，且自动化程度越来越高，在回收率、精密度、线性范围方面也有显著进步。从整体上看，CLIA、ECLIA仍是目前检测甲状腺激素的较为理想的方法，值得推广。