犬细小病毒可视化LAMP检测方法的建立与应用

潘 珺， 程敏姮， 张启龙， 张 玮， 吴 迪，宋彦军， 刘晓冬， 周德刚， 王 林， 韦海涛

(北京市动物疫病预防控制中心， 北京大兴102629)

犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引起的犬的一种具有高度接触性传染的烈性传染病。犬细小病毒为无囊膜的单链DNA病毒结构，基因组全长为5 323 bp，含有2个主要的开放阅读框(Open reading frames,ORFs)ORF1和ORF2，编码的蛋白包括非结构蛋白NS1、NS2和结构蛋白VP1、VP2[1]。自CPV流行以来，由于VP2基因不断变异，产生多种变异毒株，致使该病毒在国内外广泛流行[2]。不同年龄阶段的犬均可以感染CPV，对2～4月龄的幼犬危害最大，死亡率高达70%以上。临床以感染性腹泻症状、急性出血性胃肠炎、急性心肌炎和高死亡率为特征[3]，对养犬业造成巨大的危害，因此临床上急需一种能够快速检测CPV的方法。本试验建立并提供了一种具有高灵敏度、高特异性、高准确度、荧光可视化的检测犬细小病毒LAMP检测方法，用于犬细小病毒核酸的快速、精确地检测。

1 材料与方法

1.1 病毒株 犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)、犬冠状病毒病(Canine coronavirus,CCV)、狂犬病病毒(Rabies virus,RV)、犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)，均由北京市动物疫病预防控制中心实验室保存。

1.2 临床样品 犬健康血液(经常见疫病试剂盒检测为阴性的样本)和200份临床样品采自北京市5家宠物医院。

1.3 主要试剂 LAMP所用DNA扩增试剂盒、荧光目视检测试剂,均购自荣研生物科技(中国)有限公司；磁珠法核酸提取试剂，购自哈尔滨元亨生物药业有限公司；犬细小病毒通用型实时荧光PCR检测试剂盒，购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司；……