鉴别口蹄疫病毒O型、A型、AsiaⅠ型三重RT-PCR检测方法的建立

马震原， 闫若潜， 赵雪丽， 谢彩华， 曹伟伟， 王淑娟， 王东方， 王华俊， 王 翠

(河南省动物疫病预防控制中心， 河南郑州450008)

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD) 是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的以偶蹄动物感染为主的急性、热性、高度接触性传染病[1]。该病传播快，传染性强，暴发时可给世界范围畜牧业造成严重危害。因此，世界动物卫生组织(OIE) 将其列为法定报告动物疫病的首位[2]。我国也将其列为一类重大动物疫病。FMDV病原变异大，现已发现有7个血清型[3]，而我国主要受O、A型及AsiaⅠ型3种血清型的威胁[4]。FMDV各血清型之间无交叉免疫性，同一血清型内的不同亚型之间也只有部分有交叉免疫性[5]。因此，对FMDV的快速检测及血清型鉴定是有效控制该病流行的关键。

不同血清型FMDV感染的临床症状难以被区分，传统的检测方法很难准确判断[6-7]。目前，常用于FMDV检测的主要方法为酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA) 和分子生物学检测方法等。而ELISA目前只能用于评价口蹄疫单一血清型的抗体水平[8-9]，无法实现对不同血清型抗原进行鉴别检测。普通RT-PCR方法具有快速、特异、敏感等优点，不依赖于价格昂贵的仪器，可在基层疫病病原学检测中广泛实践应用。本试验针对O型、A型与AsiaⅠ型3种血清型设计特异性引物，建立FMDV O型、A型与AsiaⅠ型三重RT-PCR检测方法，直接对3种血清型进行鉴定，方法快速、特异、准确，为临床中有效准确地对FMDV快速分型提供有力的技术支持。

1 材料与方法

1.1 毒株 经灭活的FMDV O型、A型和AsiaⅠ型标准株细胞培养物，购自国内某单位生产的口蹄疫检测试剂盒；经灭……