微小218-5p 调控Wnt 家族成员2B 抑制骨肉瘤细胞143B 的增殖、迁移和侵袭

韦杰合，韦仁杰，周业修

骨肉瘤是一种原发性骨恶性肿瘤，主要发生于儿童和青少年，占骨肿瘤的60%。近十年来骨肉瘤的治疗策略有了很大的进展，包括手术切除、化疗或放疗，但骨肉瘤病人由于转移和复发程度高，疗效仍不理想。

MicroRNA（miRNA）是一类非编码RNA，具有抑制靶基因表达的潜力，并在增殖、分化、转移等一系列细胞生物学过程中发挥关键作用。各种研究表明，miRNA 的失调是骨肉瘤发生的主要因素之一。Wang 等发现微小RNA-193a（miR-193a）参与了骨肉瘤细胞的耐药性，增加miR-193a的表达可以促进化疗敏感性。Liu等证明微小RNA-377（miR-377）可能在骨肉瘤中作为抑癌miRNA发挥作用，诱导骨肉瘤细胞凋亡。此外，Wang 等发现，微小RNA-628-5p（miR-628-5p）通过降低干扰素诱导蛋白44 样蛋白（IFI44L）的表达来增加骨肉瘤细胞的增殖和转移。然而，miRNA在骨肉瘤进展中的作用尚不清楚。因此，明确miRNAs 的作用及相关分子机制有助于识别骨肉瘤诊断的新型生物标志物，并找到治疗的潜在靶点显得至关重要。

2016 年1 月至2019 年1 月，本研究分析了微小RNA-218-5p（miR-218-5p）在骨肉瘤中的生物学功能及其潜在机制。

1 材料与方法

1.1 实验试剂

Matrigel基质胶购自美国BD公司，胎牛血清购于美国Gibco公司，RT试剂盒、PCR相关SYBRP、逆转录试剂盒均购自于日本Takara 生物技术有限公司。兔抗人Wnt家族成员2B（WNT2B）单克隆抗体和鼠抗人三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）单克隆抗体均购自武汉三鹰生物技术有限公司，实时荧光定量PCR（RT-q PCR）相关的miR-218-5p 和GAPDH上游、下游引物设计及合成均由武汉天一辉远生物技术有限公司完成。

1.2 骨肉瘤组织伦理

骨肉瘤组织26 例，邻近正常成骨细胞组织21 例均选取于2016 年1 月至2019年1 月于河池市人民医院住院手术治疗，标本均保存于液氮罐中，全部标本均经组织学鉴定。……