猪细小病毒病灭活疫苗纯化浓缩技术研究

李应鹤，初晓红，宋 扬，徐 刚，李 贽，于 镭

（哈药集团生物疫苗有限公司，哈尔滨 150069）

猪细小病毒病是危害全球养猪业的三种重要传染病之一，给养猪业带来了巨大的经济损失。因此，为了预防和控制这类疾病，应用安全、高效的疫苗是最主要的解决途径。为了探索浓缩纯化后的病毒液的免疫效果，本试验拟采用中空纤维柱浓缩纯化技术对猪细小病毒L株灭活病毒液进行过滤纯化，并制备成灭活疫苗进行安全与效力检验[1-2]。

1 材 料

1.1 制苗用病毒液

猪细小病毒L株灭活病毒液（灭活前病毒液红细胞凝集价为1∶512，病毒含量为107.36TCID50·mL-1），由哈药集团生物疫苗有限公司制备和提供。

1.2 主要试剂

MontanideTMISA 206 VG佐剂，购自法国赛比克公司；2-溴乙胺氢溴酸盐（BEA），购自Sigma 公司；0.02 mol·L-1PBS、氯仿等原料，购自国药集团；其他试剂均为国产分析纯级。

1.3 红细胞凝集抑制抗原

猪细小病毒L株，批号为PPV-HI Ag-201401，红细胞凝集价为1∶512，规格为1.0 mL·瓶-1，由哈药集团生物疫苗有限公司制备和提供。

1.4 中空纤维超滤浓缩系统

中空纤维超滤浓缩系统，华泰净化技术工程有限公司提供。

1.5 红细胞悬液

0.5%豚鼠红细胞悬液，按现行《中国兽药典》制备。

1.6 试验动物

2～4日龄豚鼠，体重350～400 g，猪细小病毒HI抗体效价低于1∶8，由哈药集团生物疫苗有限公司实验动物中心提供；1.5～2 月龄的仔猪（猪瘟中和抗体阴性、猪细小病毒HI 抗体不超过1∶8），购自黑龙江省哈尔滨市郊某猪场，品种为长白。

2 方 法

2.1 病毒液纯化与浓缩

2.1.1 病毒液澄清

按程序安装澄清用的0.45 μm的中空纤维柱及管路，用25%乙醇清洗中空纤维柱内的保存甘油，再用纯化水冲洗，然后以2%NaOH 循环清洗中空纤维柱并浸泡过夜，再用纯化水清洗中空纤维柱内残留碱液至中性并测定水通量，用PBS平衡中空纤维柱。……