外源性Klotho对糖尿病肾病小鼠成骨细胞甲状旁腺激素刺激的分化活性调控作用

刘建梅，贾俊亚，闫铁昆，于亚民，韦丽，商文雅，林珊

天津医科大学总医院肾内科，天津300052

糖尿病和骨代谢异常之间存在密切联系［1］。研究［2-3］显示，2型糖尿病患者髋骨和脊椎骨骨折的风险增加。糖尿病肾病是糖尿病的主要并发症之一，占糖尿病患者的40%，是全球终末期肾病（ESRD）的主要病因之一。糖尿病肾病患者存在明显骨代谢改变，包括骨质减少、骨折和骨质疏松症风险增加［4-5］。Klotho是成纤维细胞生长因子-23（FGF23）的辅助受体，主要表达于肾小管上皮细胞，Klotho和FGF23两者相互作用参与矿物质平衡［6］。最近研究［7-8］发现，Klotho在成骨细胞/骨细胞中也有表达，并在骨组织—甲状旁腺激素（PTH）反应中起重要作用。研究［9-11］显示，在糖尿病肾病状态下，肾组织及循环系统中Klotho表达均有明显减少。以往研究证实PTH可促进成骨细胞分化活性的增加，可使cAMP、p-PKA、p-ERK1/2等细胞内分子表达增加［12］。2014年2月—2016年11月，本研究观察了外源性Klotho对糖尿病肾病小鼠成骨细胞PTH刺激的分化活性的调控作用，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 小鼠 18周龄KK-Ay糖尿病肾病模型小鼠及C57BL/6J正常小鼠各12只，购自协和医科大学实验动物中心，于SPF实验室常规饲养1周，断尾法测血糖后处死。

1.2 小鼠成骨细胞的培养与鉴定 利用骨片贴壁分离筛选法。处死小鼠后取股骨剪碎，与含有2 mg/mLⅡ型胶原酶和2%青霉素-链霉素的α-MEM消化培养基在37℃水浴中温育4 h，PBS洗涤骨片，并在补充有2%青霉素—链霉素和10%小牛血清（PAA）的α的A清（培养基中培养至90%汇合，即可获得骨髓间充质干细胞（BMMSC），其后在磷酸甘油及地塞米松培养基中诱导分化为成骨细胞。……