正交试验优化桑叶中蛋白提取工艺

刘苗苗，史 锐，吴 鹏，丛龙娇

(辽宁中医药大学 药学院，辽宁 沈阳 110000)

桑叶为桑科植物桑(MorusalbaL.)的干燥叶，味甘、苦，性寒，归肝、肺经。《中国药典》记载桑叶药材具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目的功效，主要用于治疗风热感冒、肺热燥咳、头晕头痛、目赤昏花等[1]，中医称之为“铁扇子”，是常用的中药材。桑叶中化学成分复杂，主要含有N-糖化合物、芸香苷、槲皮素、挥发油、蛋白质、维生素及微量元素等多种活性成分，具有降血糖、降血脂、降血压、抗菌和抗病毒等药理活性[2-4]。桑叶中蛋白含量较高，其干物质中含有粗蛋白约29.83%[5]。随着植物蛋白的药用价值的逐步被植物蛋白发现，人们将更多的目光放在植物蛋白的深入研究上。因此对其的提取工艺进行优化具有重要的学术意义和应用价值。

1 材料与仪器

1.1 材料与试剂

药材：桑叶于2019年7月采自于辽宁本溪的一棵野生桑树，经辽宁中医药大学康廷国教授鉴定为桑科植物桑(MorusalbaL.)的叶，采摘后的桑叶洗净晒干后粉碎备用。

试剂：考马斯 G-250(上海源叶生物科技有限公司)；牛血清白蛋白(上海源叶生物科技有限公司)。

1.2 仪器与设备

电热恒温鼓风干燥箱；FW100高速万能粉碎机；UV5100紫外可见-分光光度计；KQ5200DB型数控超声波清洗器。

2 方法

2.1 桑叶蛋白质含量测定方法

2.1.1 标准品蛋白溶液制备 取牛血清白蛋白50 mg，精密称定，置于100 mL容量瓶中，加水定容至刻度线，摇匀，即得浓度为0.502 mg·mL-1的蛋白质标准溶液。

2.1.2 线性关系考察 按文献[6]方法配制考马斯亮蓝G-250溶液。分别精密吸取标准品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 mL棕色容量瓶中，分别加水定容至2 mL，摇匀；……