P2Y12敲除在LPS诱导的急性肺炎肺损伤中的保护作用

张 鹏，潘改燕，孙巨军

(1.西安市工会医院a.检验科；b.肿瘤科，西安 710100；2.西电集团医院检验科，西安 710077)

肺炎是由细菌、病毒、真菌等致病微生物引起的发生在终末气道、肺泡和肺间质的炎症[1]。然而随着肺炎临床治疗过程中耐药菌的出现[2-3]，寻找新的抗肺炎药物成为临床药物研究新的挑战。嘌呤P2受体家族是比较复杂的受体家族之一，可分为门控离子通道P2X受体和G蛋白偶联P2Y受体，目前已发现7种P2X受体和8种P2Y受体。其中P2Y受体在体内分布广泛，功能复杂，迄今为止已发现的P2Y受体有P2Y1、2、4、6、11、12、13、14[4]。现在的研究发现，P2Y12受体基因与肺部炎症和哮喘的发病密切相关[5]。

脂多糖(LPS)是内毒素的主要成分，存在于革兰阴性菌细胞壁的外膜，是现在常用的动物肺炎诱导试剂[6]。本研究通过检测小鼠肺支气管灌洗液(BALF)中中性粒细胞比例和蛋白质含量，并通过HE染色观察肺组织肺损伤情况以及ELISA法检测肺组织中炎症因子水平，用于评价P2Y12敲除对LPS诱导的急性肺炎小鼠的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂

LPS购自美国Sigma公司；HE染色试剂盒购自西安百萤生物科技有限公司；小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1b)ELISA试剂盒购自上海晶抗生物工程有限公司；RIPA裂解液、BCA蛋白定量试剂盒购自上海碧云天生物科技有限公司。

1.1.2 实验动物

8周左右C57BL/6J背景P2Y12 KO小鼠(P2Y12 KO组)以及WT小鼠(WT组)购买自上海西普尔-必凯实验动物有限公司。小鼠均饲养在SPF级动物房内，室温(23±1)℃，昼夜循环12 h。将WT组和P2Y12 KO组小鼠随机分为磷酸缓冲盐溶液(PBS)处理组(对照组)和LPS处理组(LPS组)2个亚组，每个亚组小鼠40只。……