IL-18调控血管平滑肌细胞TNF-α、IL-6、IL-8的表达

罗 欣，周 宏， 顾亚男，李名聪，李昱昊，张胜权

白细胞介素(interleukin，IL)-18是促炎症因子，位于人类基因11号染色体，一个24 ku的前体，被caspase1切割成18 ku[1]。单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、内皮细胞以及皮肤角质形成细胞均能表达IL-18。 18 ku的IL-18通过与靶细胞膜上特异性受体结合激活相应的信号途径而发挥作用[2]。动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是心脑血管疾病的主要原因[3]。一般认为脂质代谢障碍是AS的始动因素，其发病机制复杂，最近的研究[4]表明，多种炎症因子在AS发生发展中发挥着重要作用，此外也发现AS斑块中IL-18的表达水平较高，并且IL-18结合蛋白(interleukin 18 binding protein，IL-18BP)能够降低AS斑块形成风险[5-6]，提示IL-18在动脉硬化发病中可能发挥作用[6]。该研究通过探讨IL-18对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)炎症因子的表达影响，以期初步阐明IL-18在AS中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂由生化教研室陈兵老师惠赠的小鼠VSMC，转染了SV40大T抗原(SV40 large T antigen)后永生化的VSMC细胞株，10只8周龄SPF级C57BL/6小鼠，体质量20～25 g，雌雄不限。小鼠VSMC由该实验室保存。鼠IL-18购自美国PeproTech.公司；DMEM培养基和胎牛血清购自美国Gibco公司；pp38、pAKT(1 ∶500)和β-actin(1 ∶1 000)抗体购自美国Cell signaling公司；逆转录试剂和RT-PCR试剂均购自日本TAKARA公司；ELISA试剂盒购自武汉贝茵莱生物科技有限公司；SB203580和LY294002购自美国Sigma公司；引物由上海生工生物工程公司合成。

1.2 引物登陆NCBI网站检索甘油酸-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、IL-6、 IL-8基因序列(人，Primer Premier 5.0软件设计引物，见表1。

表1 RT-PCR引物序列

1.3 方法

1.3.1细胞培养 从液氮中复苏鼠VSMC,用含10%胎牛血清、青霉素(100 U/ml)和链霉素 (100 mg/ml)的DMEM培养液置于37 ℃，5%CO2细胞培养箱培养。当细胞长到70%～80%时，以4×104/ml的密度接种于24孔细胞培养板。……