氧化还原HMGB1 介导间充质干细胞血管修复对动脉粥样硬化的影响

孟小虎 黄昌拼 刘永昌 解旭品 张方捷 方 欣

动脉粥样硬化是一种多因素疾病。高迁移率族1蛋白（High mobility group box 1 protein，HMGB1）是动脉粥样硬化的关键炎症介质，不同氧化还原状态的HMGB1 活性不同，完全氧化后会失去原有活性[1]。研究发现，外源性HMGB1 可抑制血小板衍生生长因子诱导的多能血管干细胞的增殖及其向血管平滑肌细胞的分化，但是氧化处理后，HMGB1 则失去上述抑制作用[2]。既往研究表明，间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）可通过选择修复模式减轻或加重动脉粥样硬化[3]，目前尚不清楚氧化还原状态的HMGB1 是否以及如何参与动脉粥样硬化。本研究通过二硫苏糖醇（dithiothreitol，DTT）及过氧化氢（H2O2）处理HMGB1，使其处于不同氧化还原状态，观察其对MSC 增殖、迁移及向血管细胞（内皮细胞及平滑肌细胞）分化的作用，以阐明氧化还原状态HMGB1介导MSC 血管修复对动脉粥样硬化的影响。

1 材料与方法

1.1 细 胞 F344 大鼠骨髓MSC（美国Cyagen Biosciences 公司，RAFMX-01001）。

1.2 主要试剂 DMEM 培养基（美国Gibco，批号11995065）、0.25%胰酶（美国Gibco，批号25200056）、胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）（美国Gibco，批号12484028）、细胞冻存液（美国Cyagen Biosciences，批号GUXMX-07021）、CCK-8 试剂盒（中国Beyotime Biotech，批号C0038）、Transwell 小室（中国corning，批号3422）、4'，6-二脒基-2-苯基吲哚（4'，6-diamidine-2-phenylindole，DAPI）（美国BioLegend，批号422801）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）（以色列ProSpec，批号CYT-116）、血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor，PDGF-BB）（以色列ProSpec，批号CYT-501）、小鼠抗CD31 IgG 抗体（美国Abcam，批号ab212711）、小鼠抗α-平滑肌抗原（α-SMA）IgG 抗体（美国Abcam，批号ab119952）、藻红蛋白（PE）偶联的抗α-SMA 抗体（美国Biodesign，批号hz-0189RPE）、Alexa Fluor 647 偶联的山羊抗小鼠IgG 抗体（中国FCMACS，批号FMS-Msaf64701）、PE 偶联的抗CD31 抗体（中国Miltenyi Biosciences，批号130-105-878）、重组HMGB1 细胞因子（美国Sigma-Aldrich，批号H4652）、H2O2（美国Sigma-Aldrich，批号18304）、DTT（美国Sigma-Aldrich，批号D0632）。

1.3 方 法

1.3.1 细胞培养 将MSC 置于含10% FBS 及1%双抗的DMEM 培养基中，放入5% CO2、37℃恒温培养箱中培养至对数生长期，使用0.25%胰酶消化进行传代培养。……