从5-HT1A、5-HT2A后信号通路探讨针刺治疗PCPA失眠机制

罗本华,庞宇舟,张玲,吴椋冰,何疆,李文康,李玉秋

(广西中医药大学 针灸推拿学院， 广西 南宁 530001)

0 引言

5羟色胺1A受体(serotonin 1A receptor，5-HT1A)和5羟色胺2A受体(serotonin 2A receptor，5-HT2A)是与睡眠和觉醒密切相关的经典中枢5羟色胺(serotonin，5-HT)神经递质的2个受体亚型，5-HT1A偶联Gi/o降低腺苷酸环化酶(Adenylate cyclase, AC)活性，减少环一磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate, cAMP)量，影响大脑调节情绪、唤醒等功能。通常5-HT1A激动能缓解焦虑、增加浅深睡眠，5-HT2A偶联G2q/11，激活磷酯酶C(Phospholipase C, PLC)，激动5-HT2A可抑制漫波睡眠、引起觉醒增加。当前，5-HT1A及5-HT2A受体拮抗剂也是睡眠失常和睡眠相关病症治疗的一线药物[1-3]；这两个受体在睡眠调节中起作用，其与中枢5-HT促眠机制有一定关系，但二者是否相关不甚清楚。针刺脐内环合失眠穴是临床失眠症的有效疗法[4]，具有改善对氯苯丙氨酸(p-chlorophenylalanine, PCPA)失眠大鼠神经行为学以及改善中枢5-HT递质障碍机制和5-HT1A(5-HT2A)受体机制等实验基础[5]，本研究旨在探讨5-HT1A和5-HT2A后信号通路对失眠中枢5-HT障碍机制改善的可能作用。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 动物

80只SPF级雄性SD大鼠，体重(250±15)g，均购自广西医科大学动物实验中心；室内20～25 ℃，昼夜循环采光，饮水不限，喂食定时，预养15 d。

1.1.2 试剂

实验PCPA试剂(批号：H30Y014；Alfa Aesar)；Ⅰ抗Gαq/11/14(Santa cruz，货号：Sc-365906 )、Gαi/o(CST，货号：5290S )、GAPDH(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, 甘油醛-3-磷酸脱氢酶；Bioswamp，货号：PAB36269)，Ⅱ抗：Goat anti-Mouse IgG (Bioswamp，货号：SAB43714 )；大鼠5-HT、cAMP、PLCβELISA试剂盒(均Bioswamp)，武汉基因美生物科技有限公司，批号：GR-201912、201907、RA20590。

1.1.3 仪器

SIGMA3-18K型低温高速离心机(德国Sigma)；Bio-Tek 800酶标仪；Thermo洗板机；BIO-RAD电泳仪；电动匀浆仪；培养箱。

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组

从80只正常SD大鼠中随机抽出16只作为正常组，剩下64只经腹腔注射PCPA溶液，制作PCPA失眠大鼠模型，筛选造模成功的48只失眠模型大鼠，按随机数字表法均分至针刺组、模型组、非穴组，各组16只。……