小鼠神经系统中蛋白质降解通路调控分子的表达和分布

宋彬彬， 董文洲， 贾炳泉， 甄 然， 彭 宇， 杨 璇， 于 佳

（北京中医药大学附属北京老年医院，北京 100095）

蛋白质降解是细胞重要的生命活动，具有蛋白质量控制、清除细胞内错误折叠蛋白质、促进蛋白激活等作用。真核细胞内蛋白质降解通路主要有3种：泛素-蛋白酶体系统（ubiquitin-proteasome system，UPS）、自噬（autophagy）和钙蛋白酶（Calpain）系统，三者降解底物或作用部位各有不同[1-2]，且受到多种分子的精细调控，包括UPS中的泛素（Ubiquitin），自噬通路中的组织蛋白酶D（Cathepsin D）、溶酶体关联膜蛋白2（lysosomalassociated membrane protein 2，LAMP2)、自噬微管相关蛋白轻链3A/B（microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3，LC3A/B）、自噬相关蛋白3（autophagy-related protein 3，Atg3）和Ras相关GTP结合蛋白7（Ras-related GTP-binding protein 7，Rab7），以及Calpain途径中的Calpain和钙蛋白酶抑制蛋白（Calpastatin）等。本实验通过生物化学方法，以小鼠眼、脑、脊髓、坐骨神经和肌肉组织为材料，检测C57BL/6J小鼠完整的神经信号转导通路中蛋白质降解通路相关蛋白在不同组织、解剖部位和亚细胞结构（胞体和轴突）的表达和分布差异。

1 材料与方法

1.1 实验动物

6周龄野生型C57BL/6J小鼠，雄性4只，雌性1只，体质量16～20 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司[SCXK(京)2016-0011]，饲养于北京老年医院屏障设施[SYXK(京)2019-0012]，根据实验动物相关管理规定进行操作和处理。小鼠处死后迅速取眼（eye）、嗅球（olfactory bulb）、皮层（cortex）、海马体（hippocampus）、纹状体（striatum）、中脑（midbrain）、小脑（cerebellum）、脑干（brain stem）、脊髓（spinal cord，SC）、坐骨神经（sciatic nerve，SN）和肌肉（muscle），冻存于－80℃冰箱。动物实验经本单位动物福利伦理委员会批准（2018BJLNYY-伦理-意见第2018-013号）。

1.2 主要试剂和仪器

10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液、蛋白酶抑制剂、PierceTMBCA 蛋白定量试剂盒、蛋白质电泳预制胶和超声波细胞破碎仪均购自美国Thermo Fisher Scientific公司；10% TGX Acrylamide Kit、Turbo小型预制转印包和Trans-Blot Turbo转印系统均购自美国Bio-Rad公司；……