桂 飞,杨伟伟,孙筱品,顾美儿
(杭州师范大学实验动物中心,杭州 310036)
目前,转基因小鼠品系已被广泛应用,但在病原微生物控制、冷冻保种、品系复苏和快速扩增繁殖等方面仍面临很大的挑战。其中,通过体外受精获得大量胚胎,并采用胚胎移植方法成功植入受体雌鼠输卵管,这是病原微生物控制和辅助生殖过程中不可或缺的一项技术[1],既可以达到生物净化的目的,有效控制病原微生物的感染[2-3],同时也可以实现快速扩增繁殖,获得大量子代小鼠。影响胚胎移植的因素有很多:一方面,不同品系之间的胚胎存在差异[4],其中近交系胚胎更敏感,存活率更低[5];另一方面,子宫承受能力也会影响移植成功率,包括单侧或者双侧移植、移植胚胎数量等因素[6]。本研究基于本中心过去几年的胚胎移植实验数据,分析影响胚胎移植的主要因素,以期探索更加高效的实验策略,为小鼠胚胎移植提供一定的指导。
实验所用APPSWE、SYN-a30p、Sox10-DTA、GFAP-creER、P53flox、ErbB2、MHC-cko、Sox10和Nrn1等277个基因修饰小鼠品系的雄鼠均由杭州师范大学医学院和生命科学院邱猛生、张遵义、刘阳、陶艳梅、鞠振宇、刘俊平和杨磊等多个课题组提供,每个品系1~2只,8~12周龄。工具鼠:4周龄C57BL/6供体雌鼠,用于超数排卵,提供卵母细胞,每个品系5只;ICR结扎雄鼠150只,8~12周龄,用于与ICR受体雌鼠交配获得假孕雌鼠;6~8周龄ICR假孕雌鼠,用于胚胎移植,每个品系3只。所有工具鼠均由杭州师范大学实验动物中心提供[SCXK(浙)2016-0004]。所有小鼠均饲养于杭州师范大学实验动物中心屏障环境中[SYXK(浙)2016-0006],可以自由采食和饮水。……