绵羊FHL2蛋白原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备

聂晓宁，李闰婷，陈龙欣，李玉华，聂文营，张丽萌，王林青

(郑州师范学院分子生物学实验室，河南 郑州 450044)

0 引言

卵巢是雌性动物体内最重要的生殖器官，可产生卵母细胞和分泌生殖激素，直接影响动物的产羔性能[1]。目前的研究结果显示，在绵羊繁殖调控机制研究中有众多的因子和蛋白在发挥调控作用，但大多数并没有深入研究。前期研究结果分析FHL2蛋白在调控绵羊繁殖性能方面有可能发挥着重要的作用，深入研究其生物学功能及作用机制也至关重要。

FHL2属于含有4个半LIM结构域的蛋白家族重要成员之一[2]，由279个氨基酸残基组成，有7个外显子和6个内含子，仅有4个外显子编码FHL2蛋白，可以与不同的结构蛋白、转录调控因子等相互作用发挥功能[3]。有研究显示，FHL2能够与多种蛋白(FOXO1、β-catenin)等互作，直接或间接地调控细胞增殖、凋亡和周期的相关蛋白因子等的表达水平，从而影响细胞的凋亡、周期。因此，深入研究FHL2蛋白在绵羊卵巢中的生物学功能尤为重要。本研究对绵羊FHL2基因序列进行克隆并表达，制备重组FHL2蛋白，通过免疫BALB/c小鼠，制备抗FHL2基因的多克隆抗体，以期为研究FHL2蛋白的生物学功能及在繁殖调控中的作用机制提供良好的基础材料。

1 材料与方法

1.1 材料和菌株

pET28a-sumo载体和pEGFP-C1-FHL2质粒均郑州师范学院分子生物学实验室保存；4～6周龄雌性BALB/c小鼠由河南省实验动物中心所提供。

1.2 主要试剂

Pfu酶、质粒小提试剂盒，均购自全式金生物技术有限公司；限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ，购自NEB公司； HRP标记的His单克隆抗体，HRP标记的羊抗鼠IgG，购自武汉三鹰；……