基于重组P113 蛋白的山羊抗绵羊肺炎支原体抗体间接ELISA 检测方法的建立及应用

张焕容，张贤宇，杨发龙

（西南民族大学畜牧兽医学院，四川 成都 610041）

绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniaeniae，MO）可引起绵羊、山羊以及野生小反刍动物的非典型肺炎[1-3]。羊感染MO 后，对多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌及副流感病毒等呼吸道病原的易感性明显增强[2,4]，给养羊业带来了很大的经济损失。对MO 感染的准确诊断和流行病学调查是其综合防控的基础。病原学与血清学检测技术是动物传染病诊断的两种重要技术。由于支原体培养较为困难，且在体外培养基中生长缓慢，传统的病原分离鉴定方法无法用于MO 感染的诊断和流行病学调查。因此，国内外已先后建立了MO 的特异、敏感的PCR检测方法[5-6]，是目前MO 感染病原学检测的主要方法。

抗体检测对疾病诊断、流行病学调查和疫苗免疫效果评价至关重要，其中ELISA 以其灵敏度高、特异性好、稳定及易于自动化操作和批量检测等优点得到广泛应用。但到目前为止，未见商品化的检测MO 抗体的ELISA 试剂盒。国内已有以MO 全菌抗原建立间接ELISA 抗体检测方法的报道[7]。但由于MO 全菌抗原与其他相关支原体之间有明显的交叉反应[8]，为进一步增强MO 抗体ELISA 检测方法的特异性，近年来国内多个学者先后采用重组P71[9]、P60（N）-P65（C）[10]以及P130[11]等MO 抗原蛋白建立了间接ELISA 抗体检测方法。

黏附素是支原体的膜表面蛋白和毒力因子，同时也是优势免疫原，可以诱导机体产生高水平的保护性抗体，是建立支原体血清学检测技术的最佳抗原之一。因此，针对其他多种支原体，已建立了基于重组粘附素的ELISA 抗体检测方法[12-15]。……