侵染昆明园林植物的4 个HCRV 分离株核壳体蛋白氨基酸序列分析*

王宇琪 ，吴保为，陶宏征，贾志强，高 雪，王景文，刘雅婷

(1.云南农业大学 农学与生物技术学院，云南 昆明 650201；2.云南农业大学 植物保护学院，云南 昆明 650201)

朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus，HCRV) 是泛布尼亚病毒科(Peribunyaviridae)番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒，2013 年在中国云南被首次发现并报道[1]，本课题组首次报道了朱顶红褪绿环斑病毒的全基因组序列[2-3]。朱顶红褪绿环斑病毒能系统侵染一点红、番茄、莴苣、旱金莲和豇豆等经济作物，主要症状为同心环纹、叶片畸形、局部褪绿和坏死[4]，对农业生产造成了严重的威胁。HCRV 为三分子基因组，分别是L RNA、M RNA 和S RNA。L RNA 仅有1 个开放阅读框，正向编码RNA 依赖的RNA 聚合酶 (RNA-dependent RNA polymerase，RdRp)；M RNA 正向编码非结构蛋白(non-structural protein of M RNA，NSm)，互补链编码糖蛋白前体(glycoproteins，Gn/Gc)；S RNA正向编码非结构蛋白NSs (non-structural protein of S RNA，NSs)，互补链编码核壳体蛋白 (nucleocapsid protein，N)[5]，N 蛋白序列保守程度较高[6]，因此通常被用于进行Tospovirus属病毒的分类检测和鉴定[7]，N 蛋白也可能与病毒粒子装配有关[8]。本研究通过RT-PCR 鉴定出葱莲、文殊兰、喜林芋和酢浆草感染HCRV 的4 份样品。为研究核壳体蛋白序列特征，通过RT-PCR、克隆和测序得到样品完整的HCRV S RNA 序列，利用ORF Finder (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/)获得其N 蛋白序列并进行分析，为HCRV 的后续研究提供基础。

1 材料与方法

1.1 材料采集

2016 年在云南省昆明市主要园林景区进行了调查，采集到八角金盘(Fatsia japonica)、葱莲(Zephyranthes candida)、酢浆草(Oxalis corniculata)、旱金莲(Tropaeolum majus)、蝴蝶兰(Phalaenopsis aphrodite)、文殊兰(Crinumasiaticum)、喜林芋(Philodendronschott) 和鸢尾(Iris tectorum)等疑似感染番茄斑萎病毒属病毒样品(图1)，主要表现为褪绿、坏死斑和皱缩等症状，将采集回来的样品用RT-PCR 进行鉴定。

1.2 总RNA 提取

采用去除多糖多酚的TransZol Plant (全式金生物技术有限公司，北京)试剂盒提取RNA，以RNA 为模板，采用PrimeScriptTMⅡ1st strand cDNA Synthesis Kit (宝生物技术有限公司，大连) 进行反转录合成cDNA。……