长链非编码RNA牛磺酸上调基因1通过激活TGF-β1/Smad信号通路发挥促大鼠肝纤维化的作用①

赵 刚 徐贵颖

(吉林大学公共卫生学院,国家卫生健康委员会放射生物学重点实验室，长春 130021)

肝纤维化属于可逆性病变，是进一步发展为肝硬化的关键环节，也是慢性肝病共同的病理特征。肝纤维化的特征为细胞外基质(尤其是胶原)在肝脏内的大量沉积。肝星状细胞的活化在肝纤维化的发生过程中发挥关键作用，活化的肝星状细胞可分泌α-SMA、collagenⅠ、TIMP-1等[1，2]。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是近年来RNA领域的研究热点之一，其可通过多种机制调控基因表达，牛磺酸上调基因(taurine up-regulated gene 1,TUG1)是lncRNA的重要成员之一，是缺氧引起的肺纤维化调节因子，也是心肌成纤维细胞-肌成纤维细胞转化的重要调节因子，但其在肝纤维化中的作用尚不清楚[3，4]。本文对肝纤维化组织和活化肝星状细胞中TUG1的表达情况及其在肝纤维化中的可能作用机制进行研究，以期为临床治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物 健康清洁级SD大鼠75只，雄性，体质量160～190 g，购自上海斯莱克实验动物有限公司，动物许可证号：SCXK(沪)2008-0016。

1.1.2主要试剂与仪器 肝星状细胞株HSC-T6(复旦IBS细胞资源中心)；兔抗α-SMA单克隆抗体、兔抗collagenⅠ单克隆抗体、兔抗MMP-2单克隆抗体，兔抗TIMP-1单克隆抗体、兔抗Smad2单克隆抗体、兔抗Smad3单克隆抗体、HRP标记的山羊抗兔抗体、β-actin单克隆抗体(美国Epitmics公司)；BCA试剂盒、RT-PCR试剂盒、TRIzol试剂盒(美国Tocris公司)；TUG1 siRNA和阴性对照siRNA(广州锐博生物科技有限公司)；转染试剂LipofectamineTM2000(美国Invitrogen公司)；胎牛血清、DMEM培养基(美国Gibco公司)；α-SMA、TUG1、collagenⅠ、MMP-2、TIMP-1、Smad2、Smad3和GAPDH引物(英潍捷基公司，引物序列见表1)。

表1 PCR引物序列Tab.1 PCR primer sequences

1.2方法

1.2.1大鼠肝纤维化模型的制备 将75只大鼠分为对照组和肝纤维化组，对照组15只，肝纤维化组60只，肝纤维化组大鼠腹腔注射1%DMN[1 ml/(kg·d)]，每星期连续用药3 d，共4周；……