腐食酪螨过敏原Tyr p 5生物信息学分析及原核表达①

吴美丽 周 鹰 崔玉宝

(无锡市儿童医院,无锡 214023)

腐食酪螨(Tyrophagusputrescentiae)遍布全世界，它常见于许多受污染的食品中，如小麦粉、小麦胚芽、奶酪、麦片、干果、蘑菇[1-2]。它可以同时耐受高温和低温，在潮湿的环境中快速生长，并已成为亚洲家庭性害虫[3-4]。腐食酪螨引起的过敏主要发生在农民与粮食工人身上，被认为与这些人的呼吸道疾病有关[5]。屋尘螨在大多情况下与腐食酪螨共存，它们可能会引起伴随的超敏反应，但对腐食酪螨的单过敏反应很难辨别[6-7]。目前仅对腐食酪螨过敏的患者也已经被报道[8]。此外，有研究表明腐食酪螨在IgE介导的超敏反应中起重要作用，并且被腐食酪螨污染的食物可能导致全身过敏反应[9-10]。目前至少已有20多种与IgE结合的腐食酪螨过敏原组分被分离出来，其中只有8个腐食酪螨的过敏原组分全长序列被报道，Tyr p 2、Tyr p 3、Tyr p 10、Tyr p 13、Tyr p 28、Tyr p 34、Tyr p 35、Tyr p 36。然而，腐食酪螨的许多致敏成分迄今为止还没有明确阐明，尤其是那些具有蛋白酶活性的。本研究采用基因工程技术对腐食酪螨过敏原组分5(Tyr p 5)进行基因克隆并用生物信息学软件对其分子特征进行预测，结果报告如下。

1 材料与方法

1.1材料NdeⅠ 酶、EcoRⅠ 酶、TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit试剂盒、TakaRa PrimeScriptTM 1st Strand cDNA Synthrsis Kit 试剂盒、高保真PrimeScriptTM RT-PCR试剂盒、PrimeSTAR@HS DNA、DNA纯化试剂盒、DNA连接试剂盒、E.coli感受态细胞DH5α均购自TaKaRa公司；pET-28a(+)由Novagen公司生产。TP3000 PCR仪购自TaKaRa公司，Mupid电泳仪购自Advance-Bio Co.Ltd公司，ImageMaster@VDS电泳成像装置购自Pharmacia Biotech公司。

1.2方法

1.2.1引物的设计与合成 根据GenBank (AY800 360)公布的Tyr p 5 CDS区序列设计引物，并加入NdeⅠ/EcoRⅠ酶切位点和保护碱基，由宝生物工程(大连)有限公司合成如下:上游引物F：5′-GGAATTCCATATGATGAAGTTCGTCATCGCCCTC-3′；下游引物R：5′-CCGGAATTCTTAGACCTTGATGGCGTTCA-3′。……