响应面法分析烟草花药胚状体诱导的最佳条件

黄子彧，刘昭伟，周 毅，刘 胜，罗 亮，胡博尊，罗 柱，戴林建

（1.株洲烟草公司茶陵分公司，湖南 茶陵 412400；2.湖南农业大学，湖南 长沙 410128）

自1967 年，Bourgin 和Nitsch 成功利用烟草花药得到单倍体植株以来，国内外开展了许多对烟草花药培养的研究工作，不断优化培养过程[1-2]。花药培养的诱导频率受多个因素的影响，如基因型、培养条件、花粉发育时期、培养基等[3-6]。陈春艳等[7]认为4℃低温预处理48 h 能显著提高花药胚状体的诱导率。贾永炯[8]的研究发现在含0.4～0.8 mg/L 2,4-D 的Nitsch培养基上胚状体发生频率有所提高。李春玲等[9]与王立浩等[10]考察了不同碳源及其浓度对花药胚状体诱导的影响，结果发现，3%的蔗糖对花药的诱导率最高。刘仁祥等[11]对活性炭、大量元素与微量元素之间的关系做了研究，发现活性炭能平衡大量元素和微量元素之间的关系，从而促进胚状体的形成。

响应面法（Response surface methodology，RSM）是一种优化反应条件的有效方法，RSM 是数学方法和统计方法结合的产物，用于对受多个变量影响的问题进行建模和分析，其最终目的是优化响应值。RSM 最先应用于化学工业领域，后来随着研究的深入和扩展，逐渐应用于生物学、医学以及食品学领域[12-14]。响应面法能系统地优化反应条件，分析各因素间的互作效应。前人的试验多是研究某单一因素对花药诱导频率的影响，并且关于采用响应面法优化烟草花药培养的报道尚不多见。因此，笔者在前人研究的基础上，以IAA、6-BA 以及大量元素浓度为考察对象，采用响应面法，试图找到诱导烟草花药胚状体的最佳条件，为优化烟草花药培养体系提供依据。……