基于EKR/AKT 信号通路探讨湿热中阻方改善脾胃湿热小鼠症状的分子机制

尤 文，周丽雅*，魏 岩，曹 路，张益蒴

（1.长春中医药大学基础医学院，长春 130117；2.长春科技学院医药学院，长春 130600）

脾胃湿热证是湿热蕴结脾胃，致脾失健运、胃失纳降而形成的证候[1]。脾胃是先天之本，气血生化之源[2]，若感受湿邪、饮食不节制，就会导致痰湿内生，郁久化热，从而生成湿热之邪，故“清热祛湿”是治疗的根本[3]。本研究中湿热中阻方是王氏连朴饮[4]加海螵蛸、白及、瓦楞子而成，具有燥湿化浊、清透蕴热、理气宣通、调达中州功效。经查阅文献可知，脾胃湿热证的改善与炎症通路、自噬通路相关[5-6]，炎症反应的发生将影响局部细胞的免疫反应增强，释放炎症因子的同时，会释放氧自由基[7-8]，直接或者间接影响到血管内皮的损伤[9]。本实验选取ERK/AKT 通路展开研究，探究湿热中阻方改善具脾胃湿热症状患鼠的分子机制。报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物与材料

1.1.1 实验动物 SPF 清洁级昆明小鼠（18～20 g）60 只，雌雄各半，周龄6～8 周，购自辽宁长生生物技术有限公司[生产许可证号SCXK（辽）2015-0001]。所有小鼠饲养于洁净级别大于10 000 的饲养室内，噪音（无动物时＜50 dB），昼夜循环（12 h/12 h），室温22～24℃，相对湿度50%～55%，动物自由摄食饮水。实验开始前动物适应性饲养7 d，实验期间实验动物伦理严格按照减少，替代，优化原则进行管理[10]。

1.1.2 实验用药与主要试剂 湿热中阻方，长春中医药大学附属医院提供；RIPA 裂解液（P0013B），BCA 蛋白浓度测定试剂盒（P0012S），上海碧云天生物技术有限公司；胃泌素（GAS）试剂盒（H239）、胃东素（MTL）试剂盒（H182），南京建成生物工程研究所有限公司；极超敏ECL 化学发光即用型底物（AR1191），武汉博士得生物工程有限公司；……