基于DPPH-HPLC的食凉茶抗氧化组分的快速筛选及分析

许平翠 张晓芹 陈礼平 王娜妮*

(1. 浙江省中医药研究院，杭州 310007；2. 丽水市中医院，丽水 323000)

食凉茶是畲族常用药材，为腊梅科植物柳叶蜡梅Chimonanthus salicifolius S. Y. Hu和浙江腊梅Chimonanthus Zhejiangensis M. C. Liu的干燥叶[1]。据《浙江省中药炮制规范》2015年版收载，食凉茶具有清热解毒、健脾益气等功效[2，3]。现代研究表明，食凉茶中主要含有挥发油、香豆素、黄酮、以及生物碱等有效活性成分[4]。研究表明，食凉茶具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗氧化等作用[5]。DPPH自由基在517nm有强吸收，与自由基清除剂反应可使吸收减弱或消失[6，7]，已有研究将DPPH-HPLC法用于筛选中药抗氧化活性成分[8，9]，目前尚无关于DPPH-HPLC法快速筛选食凉茶抗氧化活性的报道。

1 仪器与材料

SHZMADZULC-20AT高效液相色谱仪，二极管阵列检测器(PDA)；KQ-400DE型数控超声波清洗器；HC-2518高速离心机；AE-50电子天平；多功能粉碎机；MAX190酶标仪；XMTD-8222恒温水浴锅。对照品：槲皮素(批号MUST-14082610)，东莨菪内脂(批号BWB50099)，山奈酚(批号BWB50802)均购于北京世纪奥科生物技术有限公司；DPPH(≥97%，批号RQ18R305)购于上海瑞永生物科技有限公司；抗坏血酸(VC，批号20130413)购于广东光华科技股份有限公司；娃哈哈纯净水，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。食凉茶经副任中药师林娜鉴定，为腊梅科植物柳叶蜡梅Chimonanthus salicifolius S. Y. Hu的干燥叶。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

称取食凉茶粉末约5.0g，精密称定，置于圆底烧瓶中，加10倍水，回流提取2次，每次1h，合并滤液，浓缩并定容至50mL，用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.2 对照品溶液的制备

取东莨菪碱、芦丁、东莨菪内酯、滨蒿内酯、槲皮素、山柰酚对照品适量，精密称定，加甲醇配制成1mL含东莨菪碱0.025mg、芦丁0.010mg、东莨菪内酯0.0290mg、滨蒿内酯0.0120mg、槲皮素0.010mg、山柰酚0.010mg的混合溶液，备用。……