流动注射-光度法自动测定多种植物样品中过氧化物酶活性

杜璞，李永生

(四川大学 化学工程学院，四川 成都 610065)

过氧化物酶(POD)是一种广泛存在于真菌、细菌、陆生生物中以血红素为辅基利用过氧化氢介导有机和无机底物氧化反应的氧化还原酶[1-2]。POD在多个领域应用广泛[3-5]，商品POD多为辣根过氧化物酶(HRP)，但HRP产量低，价格昂贵，多种植物中POD的含量也较为可观[6-9]，POD活性的准确测定可以筛选富含POD的植物样品，对POD的提纯及应用有重要意义。

POD活性测定方法多基于手工操作[10-12]，误差大、效率低。流动注射分析(FIA)技术具有分析速度快、精密度高等特点[13-14]。本文基于GA/POD/H2O2反应体系建立一种可快速测定POD的流动注射光度分析系统(FIA-SP)，在反应非平衡态时准确、快速测定植物样品中POD活性。

1 实验部分

1.1 材料与仪器

愈创木酚(GA)、过氧化氢(30%)、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、浓盐酸(质量分数36%～38%)均为分析纯；辣根过氧化物酶(HRP，≥250 U/mg)，Sigma公司；实验用水为脱气超纯水。

FIA-3110流动注射装置；傲艺紫外-可见分光光度计；SHZ-D(Ⅲ)循环/水式多用真空泵；艾柯KL-UP-IV-20超纯水仪；CP224S电子天平；800-1离心机；pXJ-1C+型离子活度计。

1.2 溶液配制

1.2.1 磷酸盐缓冲液(PBS，0.05 mol/L，pH=6.0) 用电子天平分别称取7.8 g的NaH2PO3·2H2O和17.8 g的Na2HPO3·12H2O，充分溶解后，分别移入1 L的容量瓶中，用超纯水定容得到0.05 mol/L的磷酸二氢钠溶液和磷酸氢二钠溶液。取123 mL的磷酸二氢钠溶液和877 mL的磷酸氢二钠溶液混合，得到pH为6.0，浓度为0.05 mol/L 的PBS。

1.2.2 GA母液(45 mmol/L) 使用移液枪准确移取446 μL的GA于100 mL的容量瓶中，用PBS定容。

1.2.3 H2O2母液(15 mmol/L) 使用移液枪准确移取165 μL的H2O2溶液(30%)于100 mL的容量瓶中，用PBS定容。

1.2.4 HRP母液(10 000 U/L) 使用万分之一的分析天平准确称取0.001 g的HRP，溶解后移入 25 mL 的容量瓶中,用PBS定容。

1.2.5 植物粗酶液 将新鲜的植物样品切成小块，用榨汁机榨汁，于4 000 r/min 的离心机中离心 15 min。……