固定化酵母细胞原生质体的制备

何占魁

【教学目标】

1.应用“酵母细胞的固定化”实验中获得的技能在新的情境中解决问题;

2.发展学生的科学探究能力。

【教学重点】

1.尝试设计科学可行的实验方案;

2.原生质体的制备、分离的原理和方法。

【教学难点】

原生质体的制备和分离。

【教学准备】

1.材料用具：袋装干酵母、蜗牛酶（或β-葡聚糖酶）、葡萄糖、海藻酸钠、CaCl2、NaCl等;

2.分组：教师将全班56人分成14个小组，对学生进行合作学习技能的培训。

【教学进程】

一、提供信息——分析资料

1.固定化原生质体由于解除了细胞壁的扩散障碍，可增加细胞膜的通透性，有利于细胞内物质的分泌，是胞内酶等细胞内物质的优化生产技术。酵母细胞壁的主要成分是β-葡聚糖。

2.β-葡聚糖酶（β- 1，3 - 1，4 葡聚糖酶）：市售β-葡聚糖酶为淡黄色粉末或棕色液体，专一作用于β-葡聚糖的 1，3 及 1，4 糖苷键，产生 3～5 个葡萄糖单位的低聚糖及葡萄糖;适用温度范围为30～60℃ ，最适温度范围为50～55℃;适用PH范围4.8～7.5 ，最适 PH 范围 6.0～6.5。

3.蜗牛酶：从蜗牛的嗦囊和消化道中制备的混合酶，含纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、蛋白酶等20多种酶，酵母细胞经巯基化合物处理后， 悬浮于PH5.8-7.2等山梨醇溶液中， 每克细胞经30-40mg酶在37℃保温1小时即可溶解细胞壁， 破壁率90%以上;4℃保存。

4.海藻酸鈉凝胶是从海藻中提取获得的藻酸盐，为D-甘露糖醛酸和古洛糖醛酸的线性共聚物，多价阳离子如Ca2+可诱导凝胶形成。

5.在原生质体制备中，宜选用对数期的菌体作为材料。

二、小组讨论——设计方案

1.如何获得酵母细胞的原生质体？

2.获得的原生质体如何保存才能保持活性？……