沙眼衣原体DNA质控物的制备及评价

胥明勇，朱华强，吴泳桦，庄利东

（绵阳市中心医院检验科，四川 绵阳 621000）

目前，实时荧光聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）因其特异好、灵敏度高、快速方便、能有效避免扩增产物污染等优点，已成为分子生物学研究的重要工具[1]。然而，为了确保PCR测定结果准确，必须有严格的室内质控措施[2]。临床实验室进行分子诊断项目室内质控时，应首先考虑质控物稳定性，但目前尚未见基质与检测样本一致的沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis，CT）DNA质控物的相关报道。本PCR实验室利用临床阴、阳性样本制备质控物，并对其稳定性进行评价。

1 材料和方法

1.1 样本来源

收集绵阳市中心医院无血性、无常见其他感染性疾病患者CT DNA为强阳性的宫颈分泌物样本1例，检测循环阈值（cycle threshold，Ct值）为25.53；另收集无血性、无常见其他感染性疾病患者CT DNA阴性宫颈分泌物样本2例，混匀后检测结果为阴性，且内标结果为阳性。

1.2 仪器与试剂

采用ABI 7500实时荧光定量PCR仪（美国ABI公司）进行检测，CT DNA检测试剂盒购自湖南圣湘生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 质控物制备 将强阳性宫颈分泌物进行56 ℃、30 min灭活后，用阴性样本将强阳性样本15倍稀释后制备成阳性质控物，检测Ct值为30.40；再用阴性样本将阳性质控物15倍稀释后制备成弱阳性质控物，检测Ct值为35.30。将制备好的质控物分装于0.6 mL离心管中，标记后分别于-20 ℃和-70 ℃保存。

1.3.2 稳定性评价 （1）采用2种方法对质控物融解稳定性进行评价。从-20℃冰箱中随机抽取48支样本，随机分为A组和B组，每组各24支样本，A组37 ℃水浴复融15 min，B组室温（22 ℃）放置15 min复融，混匀后每支样本测定1次。……