柚皮素对心肌缺血/再灌注损伤大鼠PI3K/AKT信号通路和内质网应激及其相关凋亡通路的影响*

兰 卓， 王 欢， 何夕松， 游丽萍， 徐 楠， 冯 健， 李家富

（西南医科大学附属医院心血管内科，四川泸州646000）

心肌缺血/再灌注（ischemia/reperfusion，I/R）损伤是指短期内恢复缺血心肌的血流反而使缺血心肌的损伤加重的病理现象［1］，常见于心肌梗死的再灌注治疗（溶栓和PCI）和心脏体外循环手术中，很大程度上降低了心血管疾病治疗的效果。因而，改善心肌I/R 损伤的药物研究一直都是心血管领域的热门和难题。

凋亡被认为是心肌I/R 损伤重要的潜在机制之一，内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）是一种细胞凋亡调控途径，PI3K/AKT 信号通路则是一条经典的抗凋亡通路［2］。已有研究表明，PI3K/AKT 信号通路的激活可以通过调控ERS 及其相关凋亡通路从而减轻心肌I/R损伤［3-5］。

柚皮素（naringenin，NAR）是一种富含多种生物活性的黄酮类化合物，且广泛存在于柑橘类水果中，被大量用于预防动脉粥样硬化、高血压、心律失常等多种心血管疾病的研究中［6-7］。研究显示，在心肌I/R损伤的不同模型中，NAR 均具有保护作用［8-10］。本实验拟在明确NAR 减轻大鼠心肌I/R 损伤的基础上，探讨NAR 对内质网应激及其相关凋亡通路和PI3K/AKT信号通路的影响，为其临床应用提供参考资料。

材 料 和 方 法

1 相关药物及试剂

柚皮素（N164488）和 LY2940029（L124970）购自Aladdin；心肌肌钙蛋白I（cardiac troponin I，cTnI）酶联免疫吸附检测试剂盒购自ELK Biotechnology；TUNEL试剂盒购自Roche；抗cleaved caspase-3、C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein，CHOP）、caspase-12、p-PI3K 和 GAPDH 抗体购自 Abcam；抗葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein 78，GRP78）和p-AKT 抗体购自 CST；TTC 染色液、HRP 标记山羊抗兔Ⅱ抗和BCA蛋白质浓度测定试剂盒购自ASPEN。

2 实验设计

2.1 动物饲养、分组及给药 SPF级健康雄性SD大鼠48 只［6～8 周龄，体重180～200 g；购自成都达硕实验动物公……