体外肺癌上皮-间充质转化三维模型的建立及其对顺铂抵抗的机制研究*

徐 炜， 王 剑， 宋 嘉， 陈清勇

（中国人民解放军第903医院，浙江杭州310013）

既往研究表明，上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）与肿瘤的恶性生物学行为、药物抵抗和复发密切相关［1-2］。然而在经典的肿瘤EMT及耐药性研究方面，目前仍主要采用二维细胞培养（two-dimensional cell culture，2DCC）及动物肿瘤模型。而随着肿瘤研究的不断深入，肿瘤微环境的重要性已备受人们关注［3］，由于二维培养缺少细胞外基质（extracellular matrix，ECM）环境，无法进行肿瘤细胞之间、肿瘤细胞与微环境之间的交互研究；而动物实验周期较长，并且涉及到伦理道德、个体差异、免疫排斥和种属差异等问题，导致许多人类肿瘤模型无法在动物体内复制，而且动物实验最终呈现的是实验结果，但实验的中间过程是难以被观察的。

体外三维细胞培养（three-dimensional cell culture，3DCC）是介于动物实验与二维平面细胞培养之间的实验技术，该技术满足细胞培养的直观和条件可控性的基础上，尽可能模拟体内肿瘤细胞三维形态及功能，在模拟细胞与细胞之间、细胞与基质微环境相互作用方面具有独特的优势［4］。而体外肺癌三EMT 模型尚无文献报道，本研究拟采用三维培养技术在体外构建肺癌三维模型，并用转化生长因子β1（transform growth factor-β1，TGF-β1）诱导形成三维EMT肺癌模型，并对其形态、蛋白表达和药物敏感性进行研究，揭示三维培养肺癌细胞发生EMT 和顺铂抵抗的分子机制。

材 料 和 方 法

1 材料

1.1 细胞株 人非小细胞肺癌细胞系95D 购自中科院上海细胞生物研究所。

1.2 主要试剂 胎牛血清和RPMI-1640 培养液购自 Gibco；TGF-β1 购自 PeproTech；顺铂注射液购自齐鲁制药公司；……