甘草外植体诱导愈伤组织形成条件优化

付 丽， 张东向， 刘丽杰， 刘安奇， 吕 晴， 李 伟

(齐齐哈尔大学生命科学与农林学院/抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑龙江省重点实验室， 黑龙江 齐齐哈尔 161006)

甘草(GlycurrihizauralensisFisch.)为多年生草本植物[1]，我国著名的大宗常用的中药材和轻化工原料，具有缓解止疼、清热解毒、抗癌、抗衰老等疗效[2]，国内、国际市场需求量巨大，甘草的用量远超过杜仲、金银花、人参、红花、元胡等中药材，缺了甘草，中药难以成方[3]。除制药[4-5]行业应用外，还应用在食品[6-8]、饮料[9]、烟草、化工、酿造、国防工业等行业[10]。当前，大量使用和过度开发使得野生甘草资源面临枯竭，甘草组织培养体系的建立，为保护甘草资源和进行新品种选育提供了新途径。

响应面分析法(response surface methodology，RSM)[11]，具有使用方便、试验周期短、回归方程精度高等优点[12]，利用多元二次回归方程，将多因子指标相互关系用多项式近似拟合[13]，建立关于因素与影响值的函数关系，可精确研究各因素之间的交互作用[14]。本实验利用植物组织培养技术，采用 Box-Behnken Design设计方法筛选诱导甘草愈伤组织的最适培养基，探究不同激素组合对甘草愈伤组织诱导的影响。

1 材料与方法

1.1 材 料

试验于2019年4月至2020年12月在齐齐哈尔大学生命科学与农林学院植物代谢生理研究室内进行。甘草种子购自黑龙江省甘草种植基地，经专家鉴定为甘草(GlycurrihizauralensisFisch.)的干燥成熟种子，保存于4 ℃冰箱中。

1.2 方 法

1.2.1甘草无菌苗的获得

选取干燥且饱满的甘草种子，经蒸馏水浸泡24 h，置于超净工作台上，用 0.1%升汞浸泡10 min，取出……