云南春燥环境下小鼠气道RS及IL-8含量的实验研究

柏静萍 宋志敏 魏宁颐 杨梅

摘要：目的 通过观测云南春燥环境条件下小鼠气道中粘多糖（RS）、白介素8（IL-8）含量的变化，探究春燥环境对小鼠气道津液代谢及卫外功能的影响，并阐释“燥胜则干”、“肺津耗伤”、“燥犯肺卫”、“肺卫失司”等中医理论。方法 复制云南春燥环境的多重因素作用于实验小鼠，并以桑杏汤灌胃反证模型。结果 模型组小鼠气道RS含量相較于正常组有显著降低（P<0.01）;加水组小鼠气道RS含量有明显下降（P<0.05）;桑杏汤组小鼠气道RS相较模型组含量有显著提升（P<0.01）;模型组、加水组小鼠相较于正常组，气道IL-8含量明显升高（P<0.05）;桑杏汤组小鼠气道IL-8含量下降趋势明显（P>0.05）。结论 处于云南春燥环境下的小鼠气道RS含量显著降低、IL-8含量升高明显，且在桑杏汤的干预下均有改善，可初步将RS、IL-8纳入云南春燥动物模型的观测及评价的指标体系之中进一步研究。

关键词：云南春燥;桑杏汤;粘多糖RS;白介素IL-8

中图分类号：R563 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2021）01-0074-04

【Abstract】Objective： To study the effect of spring dry environment on the metabolism of airway body fluid and external health functions in mice by observing the changes of mucopolysaccharide（RS） and interleukin-8（IL-8） contents in airways of the mice in the spring dry environment of Yunnan and explain the traditional Chinese medicine theories such as “dryness brings out deficiency of fluid”， “lung fluid hurts”， “dryness offends lung” and “lung health loses”. Methods： The laboratory mice were replicated to multiple factors of spring dry environment of Yunnan and the disproof model was made by gavage administration of Sangxing Decoction. Results： The airway RS content of the mice in the model group was significantly lower than that of the normal group（P<0.01）. The airway RS content of the mice in the water added group was significantly reduced（P<0.05）. Compared with that of the model group， the content of the airway RS of the mice in the Sangxingtang group significantly increased（P<0.01） and compared with that of the normal group， the airway IL-8 content of mice in the model group and the water added group significantly increased（P<0.05）. The IL-8 content in the airway of the Sangxingtang group had a significant downward trend（P>0.05）. Conclusion： The airway RS content of mice in the spring dry environment of Yunnan was significantly reduced， and IL-8 content was significantly increased， and the content of the two groups improved under the intervention of Sangxing Decoction. RS and IL-8 can be initially included in the indicator system of animal model observation and evaluation.in the spring dry environment for further study.

【Key words】spring dryness in Yunnan， Sangxing Decoction， mucopolysaccharide RS， interleukin IL-8

外燥证，是一为外邪燥气侵袭，以目口鼻咽干涩、干咳少痰、皮肤毛发枯槁、便干结尿少等以津液匮乏之类特征为主要表现的症候[1]。云南因其独特的地势特点，形成夏秋多雨、冬春干燥的气候，加之春季风力强劲及居民擅食辛辣厚味的特点，内外合邪，形成云南特有的春燥证[2-3]。

当前，“云南春燥”相关实验研究已初见成效，本实验拟在前期实验的基础上，将小鼠置于复制云南春季“干燥多风”的气候特点的气候箱中，同时饲与辛辣食料，并予以方药反证，通过观测小鼠表征、组织及体液分子指标的变化，深入探究春燥环境对小鼠气道津液代谢及卫外功能的影响，为建立云南春燥动物模型提供进一步的科学、客观依据。研究内容如下：

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验用药 桑杏汤：桑树叶15 g，苦杏仁15 g，梨子皮20 g，南沙参15 g，浙贝母15 g，栀子皮10 g，香豆豉10 g。该方源自《温病条辨》，剂量依据导师杨梅教授诊治云南春燥证临床用量。所用中药材由云南省中医院供给，品质佳。熬制汤剂，于5倍药材量的水浸泡药材10 min，一煎武火煮沸转文火续煎15 min，滤液备用;二煎原药渣于3倍水照前法煎5 min，过滤备用。两煎药液混合混匀，加热并浓缩至100 mL，置于4℃冰箱内存放。依据人与动物体表面积换算法[4]，小鼠灌胃给药体积为15 mL/kg。

1.1.2 实验动物 SPF（♂）KM小鼠60只，体重为（20±2）g/只。来源：昆明医科大学实验动物中心;生产准许证编号：SCXK（滇）K2015-0002;饲养地点：云南中医药大学动物房。

1.1.3 实验试剂及仪器 RS试剂盒（江莱生物 JL39124）;IL-8试剂盒（Abbexa abx576773）;PBS（南京生兴生物 SN331）;动物培养箱RGX-250（上海印溪）;Multiskan Fc酶标仪（Thermo）;HR/T16M离心机（湖南赫西）;DW-86C338（J）-80℃超低温冰箱（海尔）;DK-S24恒温水浴锅（上海森信）;1290超高效液相色谱仪（Agilent）;6430LC-MS三重四级杆质谱仪（Agilent）.

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组 先将实验小鼠于动物房适应性饲喂4 d后，随机把小鼠分为正常、模型、桑杏汤及加水组4组，各15只每组。

1.2.2 干预要素 参照课题组前期实验的干预条件[5]，将正常组、模型组、桑杏汤及加水组分别放置于培养箱中。各组实验鼠干预条件要素设置如表1所示。

1.2.3 肺泡灌洗液取材 小鼠取材前禁水禁食10 h。颈椎脱臼法将其处死，仰卧位固定，用手术剪及弯镊充分暴露小鼠颈部气管，延喉头位置向下0.5 cm处气管做切口，行气管插管常规操作，向肺组织内推注37℃生理盐水1 mL，回抽此液并重复该操作2次，将采集的肺泡灌洗液离心（温度：4℃;时间：20 min;转速：2500 r/min）处理，取上清液，采用ELISA法检测小鼠气道RS、IL-8含量。

1.2.4 统计分析 实验所得数据选用软件SPSS 22.0进行分析统计，结果全选用均值±标准差（x±s）表示，组间差异对比选择单因素方差分析法（One-Way ANOVA），以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 实验结果

相较于正常组，模型组小鼠气道RS含量显著降低（P<0.01），加水组小鼠气道RS含量下降明顯（P<0.05），2组小鼠气道IL-8含量增加明显（P<0.05），差异具统计学意义;桑杏汤组小鼠气道RS及IL-8含量轻微提升（P>0.05），差异不具统计学意义。

相较于模型组，桑杏汤组小鼠气道RS含量显著提升（P<0.01），差异极具统计学意义;其IL-8含量大幅度降低趋势明显（P>0.05），但差异不存在统计学意义。加水组小鼠气道RS含量有减少（P>0.05），IL-8含量轻微降低（P>0.05），差异不具统计学意义。（见表2）

3 讨论

《黄帝内经》[5]曾有论述，人有正气，外邪不可侵，外邪侵袭必有正气内虚。中医正气的内涵与现代医学中的人体免疫如出一辙，津液也属人体正气重要组成成分[6]。若燥邪侵袭，从口鼻而入，敛于气道、皮肤，气机滞涩，肺宣发失调、津液输布障碍，肺津耗伤，致机体御邪功能受损。故本实验选取气道RS及IL-8作为微观分子观测指标，旨在探讨云南春燥环境对小鼠气道津液代谢及肺卫御邪功能的影响。

3.1 春燥环境下小鼠气道黏多糖RS含量变化 RS属黏蛋白的一部分是气道黏膜的重要分泌物，其变化代表着气道黏液的分泌状态，且与气道黏液的分泌呈正相态[7]，对于气道输布津液具有重要意义。鉴于此，本实验选择RS作为气道津液盈亏的判断指标之一，通过观察给与云南春燥环境条件因素干预的小鼠气道RS含量变化，以阐明各组小鼠津液的盈亏状况。实验结果显示，与正常组相比较，模型组、加水组小鼠气道RS含量下降显著。说明燥邪侵袭，邪正交争于气道，燥胜则干，肺气失宣，损耗津液，气道津液骤然损耗，气道黏膜因此损伤而致RS分泌量降低，津液生成输布受阻，气道黏膜表面黏液失于润泽，煎聚成痰;饮水干预后，成效不显，说明外燥侵犯，燥邪不祛，肺津不生。桑杏汤组小鼠气道RS含量明显高于模型组、加水组，说明在使用方药桑杏汤灌胃后，燥邪去而正气安，肺气得以正常宣发肃降，气道黏膜分泌功能恢复，津液生成输布正常，津生而燥解。

3.2 春燥环境下小鼠白介素8 IL-8含量变化 卫气乃属于人体“正气”的组成之一，由肺气宣发而行于外而护肌表，御外邪。肺卫的发挥与肺气的宣发密切相关，肺气充，卫气达，则机体御邪抗病能力强;反之，则卫外失之御邪屏障，易感病邪。现代有研究认为气道的免疫防御能力同中医的肺卫御邪功能存在紧密的联系[9]。白介素参与人体的多种生理病理反应，是人体免疫防御系统重要组成之一。IL-8是在机体内分布较为广泛的一种白介素，由机体炎症状态以及免疫应答所产生，对机体防御保护作用表现尤为出众。其免疫功能与中医肺宣发卫气抗邪有诸多相合之处。本实验通过观测IL-8的含量变化，以判断各组小鼠肺卫之气强弱，从而推断处于云南春燥环境条件下对各组小鼠卫外功能的影响。

实验结果显示，与正常组相比较，模型组、加水组小鼠气道IL-8含量升高趋势明显，提示，燥邪袭肺，邪正相争于气道，肺卫失宣，伤耗津液，卫气抗御外邪，机体处于激发免疫应答状态，故IL-8含量增加;加水组给与饮水干预，IL-8含量未见明显改变，免疫反应持续，说明饮水并不能祛燥邪以固肺气卫外功能。而与模型组、加水组相比较，桑杏汤组小鼠气道IL-8含量下降趋势明显，提示经方药干预后，燥邪渐退，肺气宣发，卫外御邪功能逐渐恢复，免疫反应下降。

综上所述，体内津液由肺气宣发肃降而布散全身，当“燥犯肺卫”致“肺津耗伤”之时，小鼠体液平衡状态被打破，机体津液布散失调，其呼吸道失去润养，故RS含量显著减低，气道津液丢失的同时，气道黏膜损伤致分泌功能障碍，使其分泌物（免疫因子等）的类别及含量受到影响，“肺卫失司”，机体进入邪正交争的状态，免疫应答启动，故小鼠IL-8含量上升明显。在使用桑杏汤干预后，气道RS含量上升，IL-8含量下降。说明在给与云南春燥环境要素干预的条件下，确可影响各组小鼠气道津液代谢及肺卫功能。故笔者认为，可初步将RS，IL-8纳入云南春燥动物模型的观测及评价指标体系，以进一步研究。

參考文献：

[1]陈家旭，邹晓娟.中医诊断学[M].北京：人民卫生出版社，2016：123，137-138.

[2]郑进，罗艳秋，左媛媛.云南春燥概念的提出及其临床辨治[J].中华中医药学刊，2009，27（5）：923-925.

[3]张艳.云南燥证证机研究[D].昆明：云南中医学院，2015.

[4]林银骥.云南春燥环境对小鼠表征及气道相关蛋白影响的实验研究[D].昆明：云南中医药大学，2019.

[5]陈宗瑜.云南气候总论[M].北京：气象出版社，2001：5.

[6]王冰.《黄帝内经素问》[M].北京：人民卫生出版社，1963：423.

[7]孙理军.论津液的抗病作用及其免疫学基础[J].陕西中医，2001（12）：740-742.

[8]丁建中，龚权，朱慧玲，等.外燥对小鼠呼吸道分泌功能与抗体的影响[J].长江大学学报（自科版），2005（12）：341-342+351+330.

[9]丁建中.外燥致病机制的实验研究[D].武汉：湖北中医学院，2006.

（收稿日期：2020-09-28）