肿瘤相关成纤维细胞外泌体miR-489靶向Twist1对胃癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化的影响

田宇剑,吴 胜,李 伟,周城臣*,张伟杰

(1中国人民解放军联勤保障部队第九○四医院普通外科,无锡 214044;2南京大学医学院附属鼓楼医院普通外科;*通讯作者,E-mail:sanyin1984@qq.com)

胃癌是中国高发的消化道恶性肿瘤,病例数占世界病例总数的一半,在恶性肿瘤致死原因中排第2位,患者5年生存率低于30%[1,2]。虽然手术切除与辅助治疗能有效阻止胃癌发展,但由于大多数患者就诊时已发生侵袭转移,术后肿瘤复发的可能性较大,常常导致治疗疗效不佳[3]。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞向有迁移能力的间质细胞转化的过程,可以使肿瘤细胞获得迁移、侵袭能力,是肿瘤恶性进展及肿瘤复发的重要机制之一[4,5]。微小RNA-489(microRNA-489,miR-489)是miRNA的重要成员,作为抑癌基因在多种肿瘤中低表达,其缺失与肿瘤侵袭、EMT发生密切相关。转录因子Twist1是肿瘤进展的重要调节因子,受到多种信号通路及因子的调控,通过承接上游信号并传递到下游,在细胞间联系、肿瘤微环境、迁移、侵袭、化疗耐药、EMT等过程中均发挥重要作用[6,7]。已有研究发现,诱导miR-489缺失可通过Twist1/EMT信号通路促进大肠癌转移[8]。肿瘤发生发展与微环境密切相关,肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)是肿瘤微环境中最主要的间质细胞之一,其分泌的miRNA在肿瘤细胞生物学行为中扮演重要角色[9]。本研究旨在探讨CAFs外泌体miR-489通过靶向Twist1对胃癌细胞迁移、侵袭及EMT的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

人胃癌细胞MGC-803(货号:XY-XB-1691)购自美国ATCC细胞库;人胃癌CAFs:本实验室将手术采集的新鲜胃癌组织用组织块培养法原代培养,用差速贴壁法分离、纯化后获得胃癌CAFs,每7 d传代一次,第3代进行细胞鉴定,取4-10代的对数生长期细胞用于本研究。……