基于核酸适配体结合纳米金模拟酶用于单增李斯特菌的快速检测

陈威风,陈薇,蔡颖,崔丽伟,郝修震*,王小红

1(河南牧业经济学院,河南 郑州,450046) 2(华中农业大学 食品科学技术学院,湖北 武汉,430070)

单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)是一种能够引起人类、家畜共患病的食源性致病菌，具有较强的致病性并广泛分布于人类生存环境中,如土壤、植物、水、乳制品、肉制品、蔬菜制品等。免疫力低下人群(婴幼儿、孕妇、中老年人)容易接触并感染,进而引起呕吐、脑膜炎、孕妇流产、败血病等症状,致死率高达30%[1-3]。单核细胞增生李斯特氏菌在较低的温度下也能正常生长,从而增加了感染食品的机会,其危害对于冷冻食品而言较为突出[4-5]。单增李斯特菌可形成生物膜,在食品加工设施表面定居,也能在强酸强碱环境中生存。此外,土壤中的单增李斯特菌是一种腐生菌,以腐烂的有机物为食,同时也增加了果蔬污染的风险[6]。

目前,我国食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测主要采用分离和培养方法,并结合相关的显色介质,但存在操作复杂,实验周期长等问题[7]。近年来,基于抗体的免疫学方法[8-9]、PCR[10-11]、LAMP[12-13]和分析MIC模式的VITEK2系统[14]方法等已经建立,但都具有局限性。抗体、ELISA试剂盒和RT-PCR试剂昂贵,缺乏成本效益,而VITEK2系统既复杂又耗时。因此,迫切需要开发更简单、快速的方法用于单增李斯特菌的检测。

核酸适配体是在体外合成得到的一小段DNA或RNA链。近年来,许多目标物的适配体通过指数富集配体系统进化技术在体外进行多轮筛选、扩增、富集得到[15-16],是一个相对稳定、分子质量小的化合物,易于修饰,可在体外无限合成,具有高特异性和强亲和力等优点。……