LPA对子宫颈癌干细胞生物学特性的影响及对RhoA/Rock2通路调控作用

周 用， 罗保平， 许 海

(1.湖北省中医院肿瘤科， 湖北 武汉 430060 2.湖北中医药大学黄家湖医院妇科， 湖北 武汉 430060)

肿瘤干细胞(cancerstem cell,CSC)是肿瘤发生转移、耐药和复发的根源，占总肿瘤细胞数的2%左右，对其进行靶向清除可能是根治肿瘤的一种方法[1]。近年来，人们着眼于癌细胞的生长、增殖、侵袭、转移等相关的分子信号通路来探求宫颈癌的发生机制，寻找治疗方法,取得了一系列的成果[2]。溶血磷酸酯(lysophosphatidic acid ，LPA)是与肿瘤的发生发展密切相关的细胞间信号分子，可增加肿瘤恶性程度，亦能通过刺激 Akt磷酸化、激活 NF-κB等来抑制肿瘤细胞的凋亡，与子宫颈癌的生物学表达密切相关[3]。同时可以促进肿瘤干细胞的迁移，与癌症的转移和复发相关[4]，RhoA作为在许多肿瘤中高表达的癌基因，在子宫颈癌中表达尤高[5]，并与其恶性表型相关，RhoA/Rock2信号通路在肿瘤细胞干性中发挥重要作用。已有研究证实，LPA激活RhoA/ROCK2信号通路对乳腺癌细胞的增殖有显著促进作用，而LPA是否经由RhoA/ROCK2信号通路来完成子宫颈癌干细胞的恶性生物学特性表达以及沉默RhoA基因能否抑制子宫颈癌细胞的生物学特性目前尚无定论[6]。本研究旨在探讨LPA与RhoA/ROCK2信号通路之间的关系及二者在子宫颈癌干细胞中的调控作用及机制。

1 材料与方法

1.1主要材料及仪器:Siha细胞株：购于中国科学院上海生命科学研究院细胞库；DMEM培养液、小牛血清、干细胞培养添加剂：购于美国Gibco公司，FITC-anti-CD34、PE-cy5-anti-CD44、PE-anti-CD105：购于eBioscience公司，鼠抗人RhoA、ROCK2单克隆抗体：购于台湾Abnova公司，ROCK特异性抑制剂Y-27632：购于杭州联科生物技术有限公司，反转录酶：购自Promega公司，Taq酶购自Fermentas公司，所有引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，荧光活化细胞分类仪：Beckman公司产品。……