二甲双胍调控自噬减轻高糖诱导滋养层细胞损伤的实验研究

相 萌， 张旭东， 赵 巧， 赵宗霞

(1.西安医学院临床医学院妇产科教研室， 陕西 西安 710021 2.西安医学院临床医学院拉吉姆实验室， 陕西 西安 710021) 3.西安医学院第二附属医院妇产科， 陕西 西安 710038)

妊娠糖尿病(Gestational Diabetes Mellitus，GDM)是妊娠期最常见糖代谢疾病，影响3%～30%的妊娠期妇女[1]。GDM可能会导致胎盘发育不良、促进流产和胎儿畸形等妊娠不良结局，这可能与高血糖作用相互联系。胎盘是正常妊娠及胎儿生长发育的重要场所，其正常生理功能与绒毛膜滋养层细胞密切相关[2]。证据显示，GDM患者的自噬水平明显增强，且高葡萄糖水平能够增强滋养层细胞的自噬和凋亡[3]。宋鸿碧等[4]研究显示，二甲双胍联合胰岛素泵治疗GDM患者，能够有效控制血糖、减少并发症，但二甲双胍对高糖诱导的滋养层细胞损伤情况的影响及与自噬水平的关系尚不明确。因此本研究在体外培养人绒毛膜滋养层HTR8-SVneo细胞，建立高糖损伤模型，探讨二甲双胍对高糖诱导人滋养层细胞的增殖、凋亡、自噬的影响及其作用机制，为将二甲双胍应用于GDM治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1主要材料与仪器

1.1.1主要材料:人绒毛膜滋养层HTR8-SVneo细胞(ml053596)购自上海酶联生物科技有限公司；盐酸二甲双胍片(B14202003084)购自中美上海施贵宝制药有限公司；RPMI 1640培养基(PM150110)、RPMI 1640无糖培养基(PM150122)、胎牛血清(164210-100)、青霉素-链霉素溶液(双抗)(PB180120)、D-葡萄糖溶液(PB180418)购自武汉普诺赛生命科技有限公司；0.25%胰蛋白酶消化液(T1350)、噻唑蓝(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT)(M8180)、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-fluorescein Isothiocyanate/Propidium Iodide，Annexin V-FITC/PI)细胞凋亡检测试剂盒(CA1020)、RIPA裂解液(R0020)、逆转录试剂盒(T2210-200T)、Trizol试剂盒(R1100)、ECL发光液(PE0010)购自北京Solarbio公司；……