Cx43介导GJIC与mTOR在胃癌组织中表达及意义

刘 欢， 赵 杨， 申兴斌， 刘莎莎

(承德医学院附属医院病理科， 河北 承德 067000)

在我国，胃癌的发病率及死亡率排名第二位，以中老年男性多见[1]。临床上胃癌以中晚期患者多见，传统治疗以手术治疗为主，化疗药物为辅，多种靶向药物治疗胃癌处于临床试验中，但治疗效果有待提高，因此研究胃癌潜在的治疗靶点尤为重要[2]。连接蛋白43(Connexin43，Cx43)是细胞间隙连接(gap junction intercellular communication，GJIC)的重要组成连接蛋白之一，Cx43介导的GJIC广泛存在于正常细胞膜上，是连接细胞与细胞间的信号传导跨膜通道。其组成的通道使<1000kDa分子通过，从而调控细胞增殖、分化，稳定细胞内环境等。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin mTOR)是PI3K/AKT/mTOR信号通路的重要下游蛋白分子，处于整个信号通路的中心位置，影响下游p70或4E-BP1的转录。参与基因转录翻译、核糖体生成及细胞凋亡等过程，在肿瘤增殖和侵袭中起重要作用[3,4]。在胃癌的发生发展过程中，Cx43与mTOR的表达情况是否存在一定的关联尚未见报道，值得进一步探讨。本研究通过运用免疫组化和qRT-PCR的实验方法检测Cx43及mTOR蛋白和mRNA的表达情况，探讨其与胃癌病理特征参数的相关性，探索胃癌的发生、发展机制，为寻找潜在治疗靶点提供依据。

1 材料与方法

1.1材料:收集2019年2月至9月承德医学院附属医院经根治性手术切除的新鲜胃癌患者标本60例，术前均未行放化疗及免疫治疗，所有标本均经病理证实为胃腺癌。留取胃癌组织及正常胃黏膜组织(距癌灶至少5cm以上)，一部分新鲜组织立刻放置-80℃超低温冰箱保存用于qRT-PCR实验，另一部分组织制成蜡块切片进行免疫组化实验。60例胃癌患者中男性53例，女性7例，年龄在39～85岁，<60岁28例，≥60岁32例；高中分化15例，低分化45例；TNM分期(根据AJCC/UICC胃癌TNM分期第八版)I～II期21例，III～IV期39例；无淋巴转移25例，有淋巴转移35例；≤深肌层9例，>深肌层51例。

1.2免疫组化

1.2.1方法:所有标本固定后，常规脱水、包埋，5μm切片，烘烤，常规脱蜡复水，抗原修复，去酶，封闭，滴加Cx43(抗体浓度为1∶150)、mTOR(抗体浓度为1∶150)及PBS做阴性对照，二抗IgG，滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，DAB显色。

1.2.2判读标准:Cx43、mTOR抗体表达阳性着色分布于细胞膜或细胞质，呈棕黄色颗粒，随机选择5个高倍视野(×400)，采用双盲法按阳性细胞百分比(A值)及染色强度(B值)进行评分。A值：阳性细胞所占平均百分比评分：≤5%记0分；>5%～25%记1分；>25%～50%记2分；>50%记3分。B值：染色强度评分：未着色记0分；淡黄色……