禽腺病毒血清4型感染鸡组织中NLRP3基因转录水平的实时荧光定量PCR分析

郭慧芳，李 宁，王白玉，乔麒龙，黄 庆，李永涛，王 增，赵 军

(河南农业大学牧医工程学院，郑州 450046)

禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4，FAdV-4)是属于禽腺病毒科、禽腺病毒属的双链DNA病毒，是引起肝炎-心包积液综合征(hepatitis-hydropericardium syndrome，HHS)的主要病原[1]。HHS于1987年最早发生于巴基斯坦，随后在印度、科威特、伊拉克、日本、韩国、墨西哥等国家以及中美洲、南美洲等地区发生。自2015年5月份以来，由FAdV-4新基因型导致的HHS在我国主要养禽地区流行，给我国养禽业造成了巨大损失[2-4]。目前，FAdV-4的致病机制尚不明了。现有的研究显示，致病性FAdV-4感染后诱导鸡天然免疫应答，肝中白介素1β(IL-1β)的表达量显著升高[5-6]。

IL-1β的表达和分泌与NLRP3炎症小体密切相关。多种刺激原可以激活胞质天然免疫信号受体NLRP3，激活后的NLRP3使NLRP3炎性小体组装活化，从而引发IL-1β的分泌[7-9]。NLRP3是宿主细胞的核苷酸结合寡聚结构域(nucleotide binding oligomerization domain, NOD)样受体(NLRs)病原模式识别受体(pattern recognition receptors, PRRS)识别病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns, PAMPS)或危险相关分子模式(danger associated molecular patterns, DAMPS)后，再与凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis associated speck-like protein containing a C-terminal caspase recruitment domain, ASC)及 Caspase-1(cysteine requiring aspartate protease-1, Caspase-1)共同组成的多聚蛋白复合体[10-13]。NLRP3炎性小体是天然免疫系统的重要组成部分，可响应病原刺激和细胞损伤，介导Caspase-1激活和促炎细胞因子IL-1β和IL-18等炎性因子的成熟和分泌，从而引发炎症反应[14-16]。

鉴于NLRP3炎症小体的活化与IL-1β的表达和分泌密切相关，本研究尝试建立检测鸡NLRP3的实时荧光定量PCR方法，对FAdV-4感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平进行分析，以期为解析NLRP3在FAdV-4致病机制中的作用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

致病性禽腺病毒4型(FAdV-4)毒株CH/HNJZ/2015(GenBank登录号：KU558760)由河南农业大学传染病实验室保存；……