ELF4通过Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞的增殖和侵袭*

刘 伟，朱季军，王 艳，刘云云，王玉欣，王晓松，王晓燕

江苏省宿迁市第一人民医院消化内科，宿迁 223800

胃癌(gastric cancer，GC)是全世界最为常见的恶性肿瘤之一，居癌症相关死亡率的第2位，其5年生存率总体不到30%[1-2]。近年来，随着饮食习惯的逐步改善和医疗技术的稳步提高，我国的胃癌发病率已有所减少，但其晚期预后不良的现象并未得到显著改善。因此，亟须找到用于早期诊断和治疗GC的靶点[3]。E74样受体4(E74-like factor 4，ELF4)是转录因子ETS(E23 transformation specific)家族的成员之一，可参与到免疫反应、成骨、成脂、以及癌症发生的过程，然而目前对于ELF4在胃癌发展中的相关作用及分子机制仍然不明确[4-5]。本文旨在探讨ELF4对人胃癌细胞的增殖和侵袭能力的影响，以揭示ELF4在胃癌发展中可能的调控机制。

1 材料与方法

1.1 材料

人正常胃黏膜上皮细胞GES-1，人胃癌细胞NCI-N87、BGC823、MKN45、AGS细胞系购自美国模式培养物集存库(ATCC)。DMEM培养液和胎牛血清(FBS)购自美国Invitrogen公司，Lipofectamine-3000转染试剂购自美国Thermo Fisher公司。ELF4沉默表达质粒shELF4、空白对照质粒shNC由上海生工生物技术有限公司合成。Western blot检测相关试剂购自上海碧云天公司，ELF4、Cyclin D1、MMP7、β-catenin抗体均购自美国BD公司。

1.2 实验分组

在湿润状态下37℃和5% CO2，将MKN45细胞置于含有10%胎牛血清(FBS)的DMEM完全培养液进行常规培养。当培养液微黄或变黄时将其重新消化、离心，并更换细胞培养液。本实验分为4组：shNC，shELF4，shELF4+PBS以及shELF4+LiCl。收集处于活性状态的细胞，将其消化、离心后接种于6孔板中，置于细胞孵育箱接着培养，达到70%～80%的细胞密度后用Lipofectamine-3000转染试剂进行细胞转染，转染shELF4质粒和空质粒shNC，每孔5 μg质粒，shELF4质粒组加入终浓度为20 mmol/L且溶于去离子水的Wnt通路激动剂LiCl(shELF4+LiCl)或等体积溶剂PBS(shELF4+PBS)。……