亲权鉴定基因座两步突变分析

窦永恒，王润波，张静，王海丽*

（1.河南省生殖健康科学技术研究院，河南郑州 450002；2.河南事缘法医物证司法鉴定所，河南郑州 450002）

短串联重复序列（Short Tandem Repeat，STR）是人类的一类重要的遗传标记，在法医学亲子鉴定、个体识别及遗传病连锁分析等应用中有重要作用[1-2]。在亲子鉴定实践中，出现STR基因座突变的现象是普遍存在的，且其发生突变的主要机制是复制滑动突变，只涉及一个基序的加或减称为一步突变，约占STR基因座的90%，少数突变基因会涉及几个基序，称多步突变[3]。多步突变是通过逐步突变形成的，突变的步数越多，其发生的概率越小，最多突变步数为四步。STR核心序列的变异可能导致对结果分析的偏差甚至误判[4]。因此法医物证工作者和遗传学工作者对于STR基因座突变都很重视。现对1例出现两步基因座突变的亲子鉴定案件进行分析，这在亲子鉴定中出现的概率较小。

1 仪器与方法

1.1 仪器及试剂

AGCU EX22和AGCU EX 21+1荧光检测试剂盒（包括ReactionMix、Primers、Taq酶、Allelic Ladder、AGCU MarkerSIZ-500等），购自无锡中德美联生物技术有限公司；21Plex系统荧光标记检测试剂盒（包括2.5×PCR Mix、21Plex Primers、Taq DNA聚合酶、PCR Grade Water、Orange-500等），购自江苏苏博医学科技南京有限公司。Y-STR系统荧光标记检测试剂盒（包括5×PCR反应缓冲液Ⅳ、5×27Y引物混合物、去离子水、ORG-500等），购自基点认知技术（北京）有限公司。GeneAmp 9700热循环仪、3500xl型遗传分析仪等均来自美国应用生物系统公司。直径1 cm大小血斑一份，常温晾干后存储于-20 ℃冰箱。

1.2 PCR扩增和电泳分型

PCR扩增采用血斑直接扩增。PCR扩增体系和扩增程序严格按照试剂盒的说明书操作。每次扩增以阳性对照DNA作阳性对照，阴性对照扩增管中加入纯水。……