CHO-K1细胞培养上清及其外泌体的蛋白质组分析

李浪，吴桐宇，姚宇峰，黄青丽，严继舟*

（1.南昌大学 资源环境与化工学院，江西南昌 330031；2.上海赛唐生物技术有限公司，上海 201308）

目前，治疗性重组单克隆抗体（mAb）和Fc融合蛋白在生物制药市场上占据主导地位，其市场份额占所有生物治疗制剂的35%[1]。mAB等复杂重组蛋白的生产需要能够进行翻译后修饰的宿主细胞表达系统，所以目前的治疗性重组蛋白主要由哺乳动物细胞表达生产[2]。中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）能够在化学成分明确的无血清培养基中稳定持续生长，具有良好悬浮培养适应力且能进行高密度、大量、分批补料培养，经过数十年的发展和技术优化，目前已经成为商业化生产治疗性重组蛋白的首选工程细胞[3]。2006—2014年，欧盟和美国批准上市的112种生物药物中，有65种是由CHO细胞表达生产的[4-5]。而2015—2018年，欧盟和美国共批准上市了68种治疗性单克隆抗体药物，其中57种是由CHO细胞表达生产的[6]。

CHO细胞能将表达的重组蛋白分泌到培养基中，并且超过15%的上清蛋白是目标产物[7]。工业化的CHO细胞能够在无血清的培养基中悬浮生长，以排除血清中不确定的蛋白成分对重组蛋白的影响。但工业化生产重组蛋白的方式主要是分批补料培养，活细胞分泌或死亡细胞裂解释放的蛋白质会随着培养时间的增加而逐渐积累在培养基中，不可避免地会对重组蛋白的质量造成影响。

外泌体是由生物活细胞分泌的细胞外小囊泡，其中包裹着蛋白质、DNA和RNA，能够介导细胞间的通信[8-9]。有研究发现，外泌体也能包裹重组蛋白[10]。……