褪黑素缓解糖皮质激素抑制MC3T3-E1细胞成骨分化与矿化的作用机制

赵 锐，朱 悦，陶 琳，单 军

0 引 言

糖皮质激素被广泛用作各种自身免疫和炎症疾病的抗炎和免疫抑制药物[1]。过量或长期应用糖皮质激素对骨骼造成若干不利影响，包括骨质疏松症[2]。研究表明，糖皮质激素抑制成骨细胞的生存和分化能力，这被认为是糖皮质激素诱发骨质流失过程中的一个重要机制[3]。而且，目前没有针对由糖皮质激素引起的骨质疏松症的特效治疗药物[2-4]。

褪黑素是一种从松果体中分离出来的胺类物质[5]，已知能调节许多生物作用，包括昼夜节律[6]、调节睡眠[7]，以及对免疫应答及抗氧化保护的作用等[8-10]。许多研究表明，褪黑素参与调节成骨细胞增殖和分化[11-14]，特别是低浓度褪黑素被证实可以在体外和体内增强骨形成[15-18]。然而，褪黑素能否缓解糖皮质激素所导致的成骨分化障碍尚不明确。因此，本研究旨在探究褪黑素可否缓解地塞米松导致的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞成骨分化障碍，并阐明相应的分子机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器a-MEM培养基、胎牛血清、青/链霉素溶液、胰蛋白酶(以色列Bioind公司)，DMSO、L-抗坏血酸、β-甘油磷酸钠、地塞米松、褪黑素、泛素化酶抑制剂MG132(美国Sigma公司)，BMP/TGF-β/Smad信号通路抑制剂LDN193189 (中国上海碧云天生物技术有限公司)，倒置显微镜(日本Nikon公司)，超微量分光光度计(Nanodrop，美国Thermo公司)，Roche Light Cycler© 480 II system qPCR仪器(瑞士Roche公司)，PCR逆转录仪(美国Bio-Rad公司)，酶标仪(美国BioTek公司)，Western稳压稳流型电泳仪、Western电泳槽、ECL发光仪(美国Bio-Rad公司)。

1.2细胞培养、细胞分组与成骨分化诱导细胞系为小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞，从中国科学院细胞库购买。……