基于肠道菌群探讨维生素A缺乏对小鼠肠道屏障及炎症水平的影响

周俊明，李敏利，孙 博，吴晓尉，王 彬，郭美霞，王小敏

0 引 言

维生素A缺乏(vitamin A deficiency，VAD)已成为目前发展中国家面临的严重公共卫生问题之一[1]。维生素A的经典共识是维持正常视觉功能，维护上皮组织细胞的健康，促进免疫球蛋白的合成并维持骨骼肌正常生长发育[2]。新近临床及基础研究发现，体内维生素A水平参与多种肠道屏障功能相关疾病的病理过程[3]。肠道菌群是近年来被广泛研究的新生命体，被称为“隐藏的器官”，它包括的细菌体及其代谢产物参与多种营养、代谢、免疫生理过程[4-6]。肠道菌群失衡与炎症性肠病的炎症反应联系紧密，但维生素A是否通过影响肠道菌群参与肠道屏障和肠道炎症的病理生理过程仍不完全清楚[7]。

本研究以VAD模型小鼠为研究对象，通过16s DNA测序等方法分析其肠道菌群变化，肠黏膜渗透性和肠道局部炎症水平，探究维生素A在肠道菌群紊乱相关的肠道炎症损伤中的角色，为后续通过维生素A补充(VA-Normal，VAN)调节基于肠道菌群的肠道损伤提供新思路。

1 材料与方法

1.1 实验材料动物实验所需8周龄C57BL/6雌性小鼠，32只，购自扬州大学比较医学中心，实验动物合格证号：SCXK(苏)2012-0004，小鼠饲养于SPF级标准动物房,室温25 ℃,自由进食进水，昼夜周期为12 h。小鼠定制纯化饲料VAD(VA <120 IU/kg)及VAN(VA 15000 IU/kg)购自常州鼠一鼠二动物饲料公司(各组小鼠饮食热量及其余成分摄入均匹配)。饲养过程及实验操作严格遵循美国国立卫生研究院实验动物护理及使用指南(NIH Publication No.8023,revised 1978)。

实验仪器：StepOnePlusTMReal-Time PCR System(ABI，美国)，酶标仪Model 560(Bio-Rad，美国)，包埋机(俊杰电子，中国)，冰冻切片机(Leica，德国)，HPLC检测系统(Waters Millenium，美国)，相差显微镜(Zeiss，德国)。

实验试剂：逆转录试剂盒(Abcam，美国)，SYBR Premix Ex TaqTMII(TaKaRa，日本)，HE染色套装(谷歌生物，中国)，QIAamp©DNA Stool Mini Kit(Qiagen，德国)，High-Sensitivity DNA Assay Kit(Life，美国)，IlluiminaMiSeq System(Illumina，美国)，目的基因和内参照引物(金斯瑞，中国)，小鼠IL-6/TNF-α ELISA试剂盒(酶联生物，中国)。……